Informe Laboratorio Espectofotometria

ESPECTOFOTOMETRÍA

OBJETIVOS

Familiarizarse con la utilización y el buen manejo del espectrofotómetro, al igual que aplicar los métodos para su respectiva calibración y verificación y determinar las características de una longitud de onda y cuando esta óptima para realizar una medición, teniendo en cuenta factores ambientales y otros aspectos relacionados directamente con el equipo.

MARCO REFERENCIAL

La práctica se basó en la utilización de diferentes métodos como la medición de absorbancia en varias soluciones coloreadas, también un control de exactitud, precisión y estabilidad fotométrica.

En cada medición se tomó muy en cuenta la utilización del blanco, que es la parte de la solución que no tiene soluto o colorante, este es el dato que se excluye en el equipo poniendo la escala en cero para comenzar a hacer la medición, este procedimiento es similar a cuando se tara una balanza.

Al comenzar nuestro trabajo debemos recordar la manera de usar las micropipetas, ya que solo unos microlitros de error podrían alteran nuestra medición. Por parte de una persona con más experiencia en la utilización del equipo recibimos algunas instrucciones sobre el uso de este, para evitar al máximo cometer errores sistemáticos. Algunas de ellas fueron:

• Encendido del espectrofotómetro, utilización de los respectivas opciones, manejo de la temperatura, longitud de onda a utilizar, tiempo de medición entre otros.

• La apropiada medición del blanco, y los tipos de blancos utilizados en este procedimiento.

• Los cuidados con el equipo, la manera de asegurar la tapa para evitar que la muestra tenga contacto con otras condiciones ambientales que cambien su estado.

• La dirección en la que se debe introducir la cubeta, al igual que la cantidad optima de volumen a medir, para que el haz de luz proyecte en la muestra adecuadamente.

En esta practica se utilizaron varios equipos, el que correspondió utilizar será descrito más adelante.

Los procedimientos realizados fueron:

• Lectura de Absorbancia para soluciones coloreadas: Se tomaron muestras de color amarillo, azul y rojo (1 ml c/u) y se leyó cada una de ellas con todas las longitudes de onda denotas por el equipo (340-670 nm), utilizando agua destilada como blanco.

• Control de exactitud y precisión fotométrica: A partir de una muestra de solución estándar de glucosa, se realiza el proceso con dos cubetas que este a una longitud de onda similar, en nuestro caso utilizamos dos de ellas que registraron la misma absorbancia (0,0551) utilizando como blanco el aire o el compartimiento de la cubeta.

Con el volumen indicado del reactivo de glucosa, y la solución estándar, iniciamos incubándolos en un baño maría a una temperatura de 37°C por 5 minutos,

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