Informe de laboratorio Enzimas de Restricción

Informe de laboratorio

_______________________________________________________

Enzimas de Restricción

Nombre: _______________________________

Número de estudiante: ___________________

Fecha:    _______________________________

Hipótesis: Redacta una hipótesis basada en las variables del experimento (¿De qué dependen los cortes de la enzima de restricción? ¿Cómo esperas que se vea en una gel?)

_______________________________________________________

_______________________________________________________

Resultados y Análisis

_______________________________________________________

A. Resultados.

Incluye en este espacio una foto de la gel teñida de tu grupo.

B. Determinación del tamaño de los fragmentos de restricción del ADN

1. La figura a continuación indica el tamaño del marcador o “ladder” de ADN. También tienes información del orden en que se cargaron las muestras en cada carril.[pic 1]

1. Mide y anota la distancia que viajó cada fragmento de ADN en la gel (con excepción del más grande de 23,130 bp que no va a caber en una línea recta en el paso 4). [pic 2]

En cada caso mide desde la parte baja del pozo hasta la parte baja de cada banda. Anota la distancia en centímetros y decimales (milímetros).

1. Mide y anota la distancia que viajó cada fragmento de ADN del marcador en el diagrama de la gel con excepción del más grande que no va a caber en una línea recta en el paso 4. En cada caso mide desde la parte baja del pozo hasta la parte baja de cada banda. Anota la distancia en centímetros.

1. Abre el programa Xcel y haz la gráfica siguiendo las instrucciones del lab de PCR si tiene Xcel de 2007. Si tiene la versión anterior puede utilizar las instrucciones que siguen.
2. copia la tabla con el tamaño de los fragmentos y la distancia de migración que mediste.
3. Marca la tabla y marca Insert → Chart → Chart type → Custom → Logarithmic → Next.
4. En la siguiente pantalla ve a Series y bajo la gráfica aparece de nuevo series. Oscurece distancia y luego ve a remove.
5. En la caja de Category X axis coloca el curso. Luego ve a la tabla y marca los valores bajo distancia y dale Enter o Next.
6. Chart title: Migración de marcador de ADN en un PCR.
7. Category (x) axis: Distancia de migración (cm)
8. Value (y) axis: Pares de bases (bps) → Finish.
9. Ahora marca la gráfica y dale copy.
10. Ve al informe en Word y en Edit marca Paste.
11. Para dibujar la pendiente asegúrate que tienes el toolbar de Drawing. Si no lo tienes ve a View → Toolbars → Drawing. Generalemente sale en la parte inferior.
12. En el toolbar  selecciona la raya que aparece al lado de la palabra Autoshapes.
13. Ahora ve a la gráfica y tira la pendiente. Trata de alinear el mayor número de puntos. Los que queden fuera deben estar en una posición en donde la mitad esta sobre la pendiente y la otra mitad bajo la pendiente.
14. Si no te quedó bien alineada ve a Draw → Rotate → Free rotate. Aparecerá un punto verde con una flecha de forma circular.
15. En el punto verde puedes moverlo con el cursor hasta alinear bien la pendiente.
16. Mide y extrapola la distancia de migración del  ADN amplificado por PCR utilizando esta curva. Verifica el número de bases en el eje vertical. Observa la línea roja en la figura. Aunque en WORD es difícil alinear totalmente las líneas al calcular los pares de bases trata de aproximarlo lo más posible ¿Cuántos pares de bases tiene cada banda?

1. Copia la gráfica de Xcel a tu informe y coloca el informe contestado en tu libreta de laboratorio con cinta adhesiva . Intercala en tu informe la gráfica en este lugar.  Llama al informe: EnzRest seguido por tu inicial y apellido. Ejemplo: EnzRest YRobles.  Incluye la gráfica que hiciste en Xcel en el inciso que sigue. Envía una copia del archivo de Xcel junto con tu informe.
2. Gráfica de Enzimas de Restricción: Inserta la gráfica aquí.

1. Contesta:

1. Si uno de los carriles tiene un plasmidio (Circular) sin  cortar con enzimas de restricción a que podría deberse que se ven 3 bandas?

1. Si al cortar con la enzima de restricción 1 se producen dos bandas en un plasmidio, ¿cuántos cortes hizo la enzima 1?

1. Si en otro carril tuvieras el mismo plasmidio de la pregunta anterior pero cortado con otra enzima. ¿Cuántos cortes hizo la segunda enzima para que se produjera un solo pedazo?

1. ¿Por qué al cortar con ambas enzimas se producen tres bandas?

1. Utilizando la ilustración del mapa de restricción del fago lambda de ADN enumera el número y tamaño de los fragmentos de ADN al cortarse tanto con Hind III como con Eco RI.[pic 3]

...