Laboratorio de Biología Celular BIO-131 Trabajo práctico n°3:

[pic 1]

Universidad Andres Bello

Facultad de Ciencias de la Salud

Departamento de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Biología Celular BIO-131

Trabajo práctico n°3:

Microscopia II

Integrantes:

Nicolas Bustos

Claudia Gonzalez

 Carlos Muñoz

Victoria Soriano

                                                                                                                     Sección:

1

Profesores:

 Jocelyn Neira

Fernanda Rodriguez

04-10-2017

Introducción

La microscopía es un cúmulo de técnicas y métodos, que permiten la visualización de un objeto que no es perceptible por el ojo humano, por esta razón es imprescindible el uso del microscopio.(1)

El microscopio es uno de los artefactos más utilizados dentro de un laboratorio, ya que muestra una perspectiva totalmente diferente a lo que comúnmente el ojo humano puede ver, con el paso del tiempo este instrumento ha evolucionado  considerablemente lo que permite abrir nuevas vías para el descubrimiento dentro de la ciencia. (2)

En este laboratorio se utilizó un microscopio de luz o campo claro, que básicamente está compuesto por tres sistemas: el sistema mecánico, el sistema óptico y el sistema de iluminación, siendo este último adaptado en un microscopio de campo oscuro para que el haz de iluminación llege a la muestra desde el costado, estos permitieron realizar diferentes actividades durante el práctico (3). Además  se ocupó la cámara de Neubauer que a grandes rasgos es una placa base hecha de vidrio del tamaño de un portaobjetos, que tiene ranuras fresadas que la dividen en dos zonas anchas exteriores y tres campos pequeño interiores, con este instrumento se pudo realizar la cuantificación de células contenidas en una muestra biológica fresca. Otro de los instrumentos que se utilizaron para realizar este laboratorio fue la reglilla, la cual está ubicada en el ocular del microscopio y mide 1 mm de largo, con esta reglilla se pudo medir el tamaño promedio de una célula dentro de una muestra biológica permanente. (4)

El fin de realizar este trabajo práctico es darle respuesta a una incógnita, a partir de la ejecución de diferentes actividades y/o experimentos, en donde se pudieron extraer distintas observaciones  de las actividades que se realizaron, es por esto que  al  llevar a cabo cada una de las actividades se pudo proponer una hipótesis, la cual a apunta a que la reglilla muestra un tamaño similar entre los eritrocitos y los leucocitos.

Para realizar este laboratorio se plantearon los siguientes objetivos:

→  Campo oscuro: Observar y analizar muestra biológica temporal a través de un microscopio de campo claro y oscuro.

→   Reglilla: Determinar el tamaño promedio de eritrocitos y leucocitos en un frotis de sangre permanente.

→  Determinación del número de células: Cuantificar la cantidad de células contenidas dentro de una muestra biológica temporal.

Materiales y métodos

Se entregó una bandeja con materiales, en la cual se encontraba una cámara de Neubauer con cubreobjetos, un círculo negro para generar campo oscuro,  portaobjetos, cubreobjetos  y un frotis de sangre.

Actividad A: Procedimientos y observaciones de muestras frescas

Se observó una muestra fresca de cabello, en campo claro sin tinción, vista a 10x  para visualizar el objeto más completo, ya que, a 40x como se expresaba en la actividad el objetivo no fue capaz de ser analizado en forma detallada, luego se insertó un círculo de cartón negro sobre la fuente de luz en la parte inferior del microscopio, de tal manera que la luz pase por los bordes del círculo, con el propósito de simular un microscopio de campo oscuro, en donde se pudo observar la muestra en dos situaciones diferentes.

Actividad B: Reglilla  

A continuación se procedió a calibrar la reglilla, ubicada en el ocular del microscopio, esta reglilla no estaba graduada por lo que se utilizó un portaobjetos especial como patrón, el cual entregaba como referencia 1mm. Posteriormente se ubicó el portaobjetos en el inicio de la reglilla con el fin de poder medir el tamaño promedio cada célula dentro del frotis de sangre entregado.

Actividad C: Determinación del número de células

Para esta actividad se preparó una suspensión de eritrocitos con sangre de cordero que se diluyó con PBS estéril, la cual se observó por medio de la cámara de neubauer, está fue ubicada en el microscopio para luego enfocar la cámara a una aumento de 10X en donde se identificaron los cuadrantes de la cámara. Posterior a esto la muestra se visualizó a un aumento de 40X  con el fin  de  observar y cuantificar la cantidad de eritrocitos contenidos en la muestra. Finalmente se  aplicó la siguiente fórmula para calcular la cantidad de células contenidas por cuadrante:

                             x= a x 250/n x fd= eritrocitos/mm3

a: suma de los eritrocitos por cuadrante

n: n° de cuadrantes contados

fd: factor de dilución 

Discusión

Actividad A: Observación y análisis de la muestra fresca

En la observación del cabello en campo claro se pudo ver los bordes ligeramente más oscuros que el centro de este, en dicho centro se apreciaba un color cobrizo muy claro y se divisaban solo algunas grietas escasamente visibles, luego al observar con el campo oscuro pudimos apreciar que las diferencias de tonos entre el borde y el centro disminuyó teniendo ahora en ambos sectores un color mas oscuro, ademas las grietas que previamente eran poco visibles ahora eran mucho mas sobresalientes. Estos resultados se justifican si consideramos que el cabello son células aplanadas muertas llenas de queratina (5), las cuales en el campo claro son atravesadas por la luz pues esta no encuentra ninguna estructura que absorba y refleje una determinada longitud de onda , ya que las células no poseen ningún tipo de tinción, produciendo que el centro del cabello se vea ligeramente transparente. En cambio en el campo oscuro como solo alcanzan el condensador los rayos periféricos de la fuente de luz se genera una ligera brillantes o nitidez de los detalles del cabello los cuales resaltan aún más al estar en un fondo negro (6).

...