Trabajo Practico Nº3: Microscopia

Trabajo Practico Nº3:

Microscopia.

Alumnos:

Sección:

7

Profesores:

Mauricio A. Valdivia González

Macarena M. Kaiser Castillo

INTRODUCCION.

Desde tiempos remotos, el hombre; ente racional y social, ha estado involucrado en distintos problemas que se le han presentado a lo largo de la historia. Debido a esto, desarrolló la necesidad de indagar y escudriñar en diversos temas, siendo esto indispensable para el planteamiento de distintas disciplinas de índole científica como histología, bacteriología, etc. y de este modo dar respuesta con una evidencia que sustente de la mejor manera las incertidumbres con la mayor claridad posible.

Continuando con lo anteriormente planteado, muchas disciplinas científicas tienen como principal objeto de estudio la célula; unidad básica de los seres vivos. Sin embargo, las células son estructuras diminutas que no son perceptibles por el ojo humano, además de ser completamente traslucidas, siendo esto un gran impedimento para un estudio exhaustivo y completo, requiriendo de un equipamiento e instrumentaría científica empleado en estudios de laboratorio. Es así, que el descubrimiento y los estudios de la célula se han realizado en paralelo con la invención del microscopio, siendo este último, el instrumento de laboratorio más ocupado e importante para la comprensión y funcionamiento mucho más detallado de organismos imperceptibles para la visión humana, además de células, tejidos, etc.

En base a lo anteriormente planteado, se pretende observar distintas muestras a través del microscopio y distinguir estructuras no observables a simple vista.

OBJETIVOS.

1. Comprender el funcionamiento de un instrumento óptico como el microscopio, conocer las distintas partes que lo componen y determinar el aumento con la apertura numérica de las partes a tratar en este practico

2. Observar preparaciones de muestras biológicas permanentes y distinguir distintas estructuras presentes en ellas a través del microscopio.

3. Observar preparaciones de muestras frescas con y sin tinción, y distinguir distintas estructuras presentes en ellas a través del microscopio.

MATERIALES Y METODOS.

En primera instancia, se llevó a cabo la instalación correspondiente del microscopio, a su vez se observaron los distintos componentes de este instrumento para poder llevar a cabo el práctico de laboratorio. Además, en esta primera parte se anotaron el aumento y la apertura numérica de las siguientes partes del microscopio; lentes objetivos (ubicados en la parte cilíndrica o cañón de los lentes) la apertura numérica para los aumentos 4x, 10x, 40x y 100x, para los lentes oculares el aumento y la apertura numérica, y solo la apertura numérica del condensador.

Posteriormente, se realizó la observación de una muestra (anteriormente preparada), siendo esta una letra de papel a través del microscopio. Se observó esta muestra con el lente objetivo 4x y 10x, y se dibujó todo lo observado a través del ocular del microscopio, comparando la orientación de tales imágenes con la letra del portaobjeto.

Por otra parte, se realizó la observación de una muestra, siendo preparada con 1 cm2 de papel milimetrado, al cual se le agrego agua destilada y se le coloco un cubreobjetos. Luego se observó el papel milimetrado con el aumento en 4x, 10x y 40x. Se contabilizaron los cuadros en cada aumento y se determinó el diámetro en cada campo visual, sabiendo que un cuadro corresponde a 1mm2 y finalmente se transformó el diámetro de la imagen observada en 4x a unidades micrométricas. Cabe destacar, que la fórmula para determinar el diámetro del campo visual del lente objetivo es:

Dónde:

Continuando con la observación de muestras, en este caso se observaron muestras permanentes, estas fueron previamente intervenidas a través del proceso de fijación para preservar la morfología y composición química de las células, siendo estas muestras entregadas listas para ser observadas. En primera instancia, se determinó el tamaño celular, para lograr esto se ocupó una muestra de sangre preparada previamente y entregada a cada grupo por el profesor. Luego se observa tal muestra y se contabilizan el número de células apreciables y a través de la siguiente formula determinar el tamaño celular.

Dónde:

En segunda instancia, se observaron dos muestras previamente preparadas, una correspondiente a un corte de intestino delgado de Rattus norvegicus (Berkenhout) e hígado de la misma especie. Posteriormente se observaron ambas muestras con un aumento de 4x, 10x y 4x0, siendo esta ultima la utilizada para determinar, dibujar y anotar de la mejor forma posible todo lo apreciable en el campo visual.

Paralelo a esto, se realizaron observaciones de muestras frescas con y sin tinción. Siendo la primera observación un catafilo de cebolla, el cual fue preparado cortando con una hoja de gillete limpia de forma transversal el tejido, se removió tal epitelio y se colocó en un portaobjeto, al cual se le agrego una gota de agua destilada a través de una pipeta Pasteur con gotario, luego se colocó un cubreobjetos sobre la muestra de catafilo, quedando la muestra cubierta por el agua, la muestra es puesta a observación con un aumento de 4x, 10x y 40x, siendo esta ultima la ocupada para determinar estructuras y dibujar. Posteriormente se le agrega tinción a un lado y se inclina el portaobjetos para que el colorante baje y atraviese el tejido, luego se coloca el cubreobjetos cuidadosamente para no generar anomalías en la muestra que puedan distorsionar la observación. Se limpian los excesos de agua y colorante de la muestra y se colocan a observación con un aumento de 4x, 10x, y 40x, siendo esta ultima la ocupada para determinar estructuras y dibujar.

Por otra parte, se observa una hoja de Elodea sp.la cual se coloca sobre un portaobjeto y se coloca el cubreobjetos para ser observado con un aumento 4x, 10x y 40x, siendo esta ultima la ocupada para determinar estructuras y dibujar.

En segunda instancia, se prepara una muestra con protozoos, los cuales se agregan en el portaobjetos a través de la pipeta Pasteur con gotario cuidadosamente para no generar distorsiones en la observación, se coloca el cubreobjetos y se limpia el exceso de agua para ser observada la muestra con un aumento 4x,

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