MANUAL DE LABORATORIO DE INMUNOHEMATOLOGIA

UNIVERSIDAD VERACRUZANA

UNIDAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

FACULTAD DE BIOANALISIS

LICENCIATURA EN QUIMICA CLINICA

M. en C. Rosa Estela Sandoval Pérez

Inmunohematologia

Compilador: Efraín Lozano Carmona

Xalapa, Ver a 28 de abril de 2011

MANUAL DE LABORATORIO DE INMUNOHEMATOLOGIA

INDICE

PRACTICA #14

CUANTIFICACION DE HEMOGLOBINA

OBJETIVO

 Determinar la concentración de hemoglobina en sangre por el método de cianometahemoglobina.

INTRODUCCION

FUNDAMENTO

En este método la hemoglobina reacciona con el ferrocianuro de potasio formando cianomnetahemoglobina. La densidad óptica de este pigmento es medida a 540nm comparada con un patrón conocido.

MATERIAL

Gradilla

1 pipeta graduada de 5ml

1 pipeta Sahli con boquilla

2 tubos de ensaye 13x100

Papel parafil

Espectrofotómetro filtro 540nm

Solución de cianometahemoglobina (Drabkin)

Solución patrón de hemoglobina de 60mg/dl

Sangre problema con anticoagulante

PROCEDIMIENTO

1. Colocar en un tubo de ensaye de 13x100 5 ml de solución Drabkin.

2. Con una pipeta de Sahli agregar 0.02ml de sangre problema.

3. Tapar el tubo con papel parafil mezclarlo por inversión y dejarlo reposar por 10min.

4. Leer la absorbancia a 540nm ajustando a 100% con blanco de cianometa.

5. Convertir el porcentaje de absorbancia en gramos de hemoglobina por decilitro usando la solución patrón para obtener el factor de calibración.

Concentración del estándar

Factor de calibración =

Absorbancia

Concentracion de Hb= absorbancia Pb x factor

RESULTADOS

Se anexa una curva de calibracion

VALORES DE REFERENCIA

Hombres 14.0-18.0 gr/100ml

Mujeres 13.5-16.0 gr/100ml

INTERPRETACION CLINICA

BIBLIOGRAFIA CITADA

PRACTICA #15

DETERMINACION DE HEMATOCRITO

OBJETIVO

 Determinar el volumen de hematocrito en sangre por el método de microhematocrito.

INTRODUCCION

FUNDAMENTO

El volumen globular o el volumen de hematocrito, es el porcentaje de células rojas en relación a la cantidad total de sangre.

MATERIAL

Gradilla

Tubos capilares

Lector de hematocrito

Micro centrifuga

Mechero Bunsen

Sangre problema con anticoagulante

PROCEDIMIENTO

1. Llenar las dos 2/3 partes del tubo capilar con la sangre problema (mezclar por inversión).

2. Sellar el capilar por el extremo opuesto con la flama del mechero rotándolo para que el sellado sea uniforme.

3. Centrifugar de 5 a 8 minutos a 12000 rpm

4. Tomar la lectura con el lector de hematocrito. En caso de no contar con un lector utilizar una regla mediante las alturas de volumen de eritrocitos y de volumen total de la muestra de la siguiente forma:

Hematocrito: Altura de eritrocitos x 100

altura del volumen

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