MICROBIOLOGIA PRESCOTT Y CAPITULO 8 MANUAL DE LABORATORIO MICROBIOLOGIA

TECNOLOGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES ECATEPEC.

INGENIERIA BIOQUÍMICA.

BIOLOGÍA.

GABRIELA  ZAFRA JIMENEZ.

RESUMEN CAPITULO 2 MICROBIOLOGIA PRESCOTT Y CAPITULO 8 MANUAL DE LABORATORIO MICROBIOLOGIA.

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25 AGOSTO 2018

RINCÓN ORTEGA IRERI.

MICROSCOPÍA.

En microbiología se estudian microorganismos y su funcionamiento, puesto que son imperceptibles al ojo humano, se hace uso del microscopio.

El primer microscopio fue diseñado por Robert Hooke en 1665 y fue perfeccionado por  Anton Van Leeuwenhouek  en 1668 agregándole un alto poder de resolución.

La resolución es la capacidad de una lente para separar y distinguir 2 objetos pequeños que están muy juntos, para encontrar los límites establecidos para la resolución se utiliza la ecuación de Abbé en donde:

[pic 1]

d= distancia mínima para visualizar los objetos separados.

λ=longitud de onda de la luz que se emplea para iluminar la muestra. Donde λ< d para que se pueda observe con claridad.

n= índice de refracción

ϴ= Mitad del ángulo del cono de luz que entra al objetivo, depende del índice de refracción. n sen ϴ =Apertura numérica (AN) que es la medida de captación de la luz por la lente.

La luz tiene forma cónica después de que incide en un microrganismo y atraviesa un condensador; si su vértice es agudo no se separan adecuadamente las imágenes y la resolución es baja.

Las lentes que funcionan en el aire tienen una apretura numérica < 1.0, para aumentar el índice de refracción se necesita aceite de inmersión, así los rayos de luz que no pueden pasar por el objetivo debido a la refracción y reflexión, podrán hacerlo.

La resolución  total del microscopio queda definida por la ecuación:

   .[pic 2]

Tipos de microscopios

Existen 2 tipos de microscopios: ópticos y electrónicos.

►Los Ópticos: Funcionan con lentes de vidrio  que desvían y enfocan los rayos de luz para producir una imagen virtual ampliada de los objetos a estudiar. Este microscopio se divide en:

• Simple o estereoscópico: que contiene un lente convergente que proporciona una imagen virtual no invertida, no se puede observar en ellos objetos microscópicos debido a la limitación de ampliación.

Contiene 2 lentes objetivo de bajo aumento y dos lámparas, en una los rayos atraviesan el cristal de la platina  proporcionando una iluminación tenue y la otra se encuentra en el sistema de los lentes, proyecta la luz sobre el objeto para observar cuerpos opacos.

• Compuesto: funcionan mediante la combinación de diferentes lentes y una fuente de iluminación.

Se compone del sistema mecánico: 

*  La base o pie es la superficie de contacto con la mesa de trabajo

 *  Brazo: se encuentra unido al tubo óptico y a la base.

 *  Tubo óptico: pueden ser monoculares y binoculares.

 *   Revolver porta objetivos: disco de plástico con 3 o 4 orificios en donde se encuentran          los lentes objetivos de menor a mayor potencia de aumentos.

*  La platina: plataforma metálica de color negro presenta en el centro un orificio por donde pasa la luz  que proviene de la fuente de iluminación. Contiene pinzas para sostener los portaobjetos.

Tornillos: macrométricos, micrométricos  y elevador de condensador

Sistema óptico:

* Lentes oculares: pulidos y transparentes una superficie es convexa. Su función es aumentar es ampliar virtualmente  la imagen formada.

*Lentes objetivo: Parte más importante por su poder de resolución.

Secos: alcanzan  una distancia focal a varios cm de la muestra porque hay aire entre el cubreobjetos y la lente; y de inmersión, se utiliza aceite de cedro con índice de refracción 1.52.

*Condensador: compuesto por 2 lentes convergentes, hace que los rayos luminosos,  procedentes de la lámpara,  se desvíen al atravesar las lentes convergentes formando un cono de luz.

*Diafragma: regula la cantidad de rayos luminosos que deben pasar al interior del condensador.

*Espejo: consta de 2 espejos una para la  luz natural y el otro artificial.

*lámpara

*Filtros básicos: dispositivos de vidrio transparente con color, absorben las longitudes de ondas  para proporcionar una luz que mejore la observación.

Dentro de los microscopios compuestos están los de campo claro, campo oscuro, contraste de fases y de fluorescencia.

Microscopio campo claro: forma una imagen oscura frente a un fondo claro, la lente del objetivo forma una imagen real aumentada en el microscopio  y la lente ocular define esta.

La parte más importante del microscopio es el objetivo en ellos se crea una imagen aumentada y clara. Regularmente cuentan de 3 a 4 de aumentos entre  x4-x100, su distancia de trabajo es la distancia entre la superficie frontal de la lente y la superficie del cubreobjetos. La distancia de trabajo es corta cuando los objetivos tienen AN y resolución elevados. Para obtener el aumento total se multiplica el aumento ocular y el aumento del objetivo.

Algunas células vivas no tienen color por lo que se tiñen y fijan para que haya un contraste de color en las estructuras celulares. Estas células pueden observarse en el microscopio de campo oscuro en donde se puede cambiar la forma en que son iluminados sin necesidad de tinciones, se le quita el condensador Abbé y se cambia por un condensador  campo oscuro, funciona  enfocando un cono  hueco de luz sobre la muestra para que solo la luz que haya sido reflejada o refractada pueda formar una imagen; el objeto queda iluminado y el campo que lo rodea es negro.

El microscopio de contrafase también se utiliza para células vivas no teñidas. Requiere de  un diafragma anular; que está en el condensador es un disco opaco con un anillo transparente que produce un cono hueco de luz, cuando lo atraviesan, algunos rayos se desvían por la densidad y el índice de refracción. También tiene una placa de cambio de fase. Los rayos que se refractan sufren un retraso en su velocidad de traslación con respecto a los rayos que transitaron normalmente después de atravesar el objeto por lo que el fondo de luz difractada es claro y el objeto aparece oscuro. Se emplean filtros de color para mejorar la imagen.

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