Metodologia

Metodología

1. Determinación de los compontes de las aguas residuales

Las muestras de aguas residuales a utilizar se obtienen de la fábrica de dulces “la estrella”, que posteriormente serán analizadas en la comisión nacional de agua (CONAGUA) donde se harán estudios de los parámetros físico-químicos, DBO5 y DQO.

Debido a que A. chroccocum, A. brasilense y G. intraradices no requieren N para el medio de enriquecimiento es necesario identificar la existencia de proteínas en el agua residual por medio del método de biuret y de Bradford.

Para la identificación de carbohidratos se lleva a cabo la reacción de Seliwanoff para la identificación de sacarosa, y la reacción de Benedict para identificar la presencia de monosacáridos, en base a la identificación de grupos reductores libres.

1. Reproducir la cepa de Azotobacter chroccocum, Azospirillum brasilense y glomus intraradices

Los microorganismos a estudiar fueron proporcionados por el instituto de ciencias de la universidad autónoma de puebla (ICUAP) que serán resembrados en los siguientes medios de enriquecimiento:

Azotobacter chroccocum

Como medio de enriquecimiento para azotobacter chroccocum se utiliza agar Ashby.

Azospirillum brasilense

El medio de cultivo usado para el enriquecimiento de Azospirillum spp. es NFb semigelificado y con malato como fuente de carbono.

Glomus intraradices

Para esta cepa en específico, se utiliza medio de cultivo líquido S.O.C. el cual es medio preparado con una solución al 2% de bactotriptona, 0.5% extracto de levadura, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl y 20 mM de MgCl2 6H2O + MgSO4 7 H2O

Conservación de los aislamientos mediante la técnica de criopreservación en Glicerol al 50% (v/v).

1. Neutralización y procesamiento de las muestras de agua

Los microorganismos a utilizar requieren de un pH aproximado de 7.4±0.2, que es el pH óptimo de los microorganismos a estudiar, utilizando NaOH.

Debido a que las aguas residuales se encuentran demasiado concentradas de materia orgánica se utilizaran diluciones de 10-5, 10-6, 10-7, 10-8 y 10-9.

1. Preparar distintos caldos de cultivo con la muestra a diferentes concentraciones

Se vierten las distintas soluciones en las cajas de Petri, llevando a cabo ensayos por triplicado para cada microorganismo dando un total de 15 medios nutritivo para cada microorganismo (A. chroccocum, A. brasilense y G. intraradices).

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