Metodos De Cultivo

Diferentes Métodos de Siembra

- Sembrar: Es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo para promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación.

El resultado de una siembra se llama: Cultivo

• Las siembras pueden ser:

- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez

- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria

Métodos Generales:

1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.

Medio de cultivo: Liquido

Instrumento: Asa

Finalidad: poner la bacteria en suspensión

2) Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material en la superficie de el agar inclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie inclinada y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo.

Medio de cultivo: agar base inclinado

Instrumento: asa o aguja bacteriológica

3) Siembra por estría por agotamiento:

3) Siembra por estría por agotamiento: Con éste procedimiento se puede conseguir una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo y se descarga sobre la superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de varias formas:

a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. Cuando se quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cual se repite la operación sin tomar con el asa nuevo material.

b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estría luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en el último cuadrante aparecerán las colonias aisladas

c- El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde, se esteriliza el asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente.

Medio de cultivo: solido en placa de Petri

Instrumento. Asa

Finalidad. Obtener colonias aisladas

4) Por picadura o punción: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.

Medio de cultivo. Semisólido

Instrumento: aguja bacteriológica

Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias

5) Siembra en TSI: (Por picadura y estrías en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el rojo fenol.

En este medio sembraremos por picadura y estrías en superficie, como ya conocemos, para estudiar los cambios que ocurrirán en superficie y profundidad. A lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y según lo hagan en la parte superior o inferior del tubo, estarán indicando su comportamiento frente a los azucares, los cambios indican lo siguiente:

Técnicas de siembra

:El método de siembra por estría en placa

Es el

método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de siembra se tomauna muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólidopreparado en una placa Petri

(a las placas Petri también se les denomina simplemente placas). Conforme se vanhaciendo estrías en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menosmicroorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimasestrías y se continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo esteproceso varias veces se logra separar células individuales. A continuación, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula, no podemosasegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir deuna colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con todaseguridad, cultivos axénicos.

Los métodos de vertido en placa y extensión en placa

En estos métodos, las suspensiones de células microbianas se diluyen

antes

de su siembra en placa. Se siguenestas técnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos, que la dilución no se puede realizar en unasola etapa. Por ejemplo, una suspensión con mil millones de células por mililitro debe ser diluida 10

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veces paraobtener una suspensión con un centenar de células por mililitro, Por tanto, se realizan diluciones seriadas

(envarias etapas), normalmente de diez en diez, pero a veces de cien en cien. Para realizar diluciones de diez endiez, se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (le medio estéril o solución salina, igualmente estéril. Seagita vigorosamente para diluir las células y el proceso se repite cuantas veces sea necesario. A continuación, sepuede proceder de dos maneras diferentes.En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten en placa.Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán en la superficie. Las colonias superficiales seextenderán y serán más grandes. En el segundo método (extensión en placa), las muestras diluidas se siembrandirectamente en la superficie de la placa de agar, extendiéndolas con avuda de un asa de Diralsky de cristalestéril. La suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianas sobre la

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