Microscopia

MICROSCOPIA

Se ocupa el microscopio, que su principal propósito es el aumento visual, mediante objetivos que facilitan al ojo humano la formación de una imagen nítida en la retina cuando el ojo está ópticamente cerca de un objeto para poder visualizarlo con claridad (1).

La amplificación o aumento es el vínculo de lo que se puede observar a simple vista y lo que podemos ver con el microscopio. También es el número de veces que se aumenta la visión de un objeto muy por encima de su valor real (2).

Cuando hablamos de poder de resolución hacemos referencia a la máxima amplificación útil del microscopio (3). Se mide utilizando como unidad la inversa del límite de resolución; éste se calcula por la formula de Abbe:

Límite de resolución= 0.61 x longitud de onda / apertura numérica

La longitud de onda dependerá de la luz empleada. La apertura numérica es igual a: n xsenα. Siendo n el índice de refracción y α el ángulo de semiapertura de la lente (4).

MICROSCOPIO FOTÓNICO

Microscopio de campo claro.

El microscopio óptico de campo claro (Figura 1) está compuesto es un tubo que tiene dos lentes (uno en cada lado), sirven para ampliar sucesivamente la imagen del objeto, el cual esta intensamente iluminado; una de esas dos lentes se le denomina lente objetivo, ya que se encuentra próxima al objeto; a la otra se le llama lente ocular, esta se sitúa junto al ojo del observador; este sistema simple se perfecciona añadiendo lentes intermedias, las cuales multiplican el aumento, además de tener un condensador, el cual concentra la luz por la fuente luminosa sobre el objeto, u otros diversos dispositivos para el aumento del contraste (5).

Figura 1. Microscopio óptico de campo claro. José A. Cortés. © 2001. Recuperada de: http://www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm.Última modificación 17-03-2005.

Microscopio de contraste de fases. (Figura 2)

Con este tipo de microscopio es posible obtener imágenes de células y tejidos no teñidos, vivos y trasparentes (6). Ésta técnica aprovecha los fenómenos de refracción y de difracción de las ondas luminosas. Genera una imagen en la que el grado de oscuridad o luminosidad de una zona de la muestra depende de su índice de refracción (7).

Figura 2. Microscopio de contraste de fases. Recuperada de http://morfoudec.blogspot.mx/2008/07/microscopa-de-contraste-de-fase.html

Microscopio de campo oscuro (Figura 3)

Se utiliza para examinar microorganismos vivos que no son visibles con el microscopio común o que tampoco pueden teñirse. En éste microscopio tiene un condensador especial que incluye un disco opaco. Dicho disco bloquea la luz que llegaría directamente al objetivo; por lo que solo ingresa la luz reflejada por la muestra. Como ya no hay luz en el fondo directa, la muestra aparece contra un fondo negro (8).

Figura 3. Microscopio de campo oscuro. Recuperada de http://www.google.com.mx/imgres?hl=es&sa=X&biw=1092&bih=533&tbm=isch&prmd=imvnsb&tbnid=rxDI7LX69rYlsM:&imgrefurl=http://morfoudec.blogspot.com/2008/07/microscopa-de-campo-oscuro.html&docid=r7POcD4KA61dZM&imgurl=http://1.bp.blogspot.com/_SBO4k-8eZTI/SHkTBWzUCoI/AAAAAAAAAkM/ydIe_IjMAsM/s400/microscopia%252Bde%252Bcampo%252Boscuro%252B1.JPG&w=364&h=263&ei=K-F3T9-7GsGy2wXmqIi2Bg&zoom=1&iact=rc&dur=390&sig=107932691258258118317&page=1&tbnh=141&tbnw=191&start=0&ndsp=10&ved=1t:429,r:1,s:0&tx=80&ty=62

Microscopio de inmunofluorescencia.

• Microscopio de fluorescencia. (Figura 4)

Se dice que algunos colorantes denominados fluorocromos tienen la propiedad de ser excitados (que es pasar a un nivel superior de energía) cuando absorben luz UV. Y a medida que las moléculas excitadas regresen a su estado normal liberaran el exceso de energía en forma de luz visible. Esta propiedad se le denomina fluorescencia. Podemos usar un microscopio óptico pero con algunas modificaciones, las cuales son: una fuente de luz de más alta intensidad, un lente de cuarzo para el condensador, filtros de excitación y en filtro de barrera. Si un microorganismo es teñido con un colorante fluorescente, y se observa con este tipo de microscopio, se verá un objeto o cuerpo brillante sobre un fondo obscuro. Existen técnicas de inmunofluorescencia que son usadas para detectar antígenos en células o anticuerpos (9).

Figura 4. Microscopio de fluorescencia. Marta Valeri. © Institut Recerca Hospital Universitari Vall d’Hebron. Recuperada de http://www.google.com.mx/imgres?num=10&um=1&hl=es&biw=1092&bih=533&tbm=isch&tbnid=tuxRYBGz9XkCRM:&imgrefurl=http://www.ir.vhebron.net/easyweb_irvh/Serveis/UCTS/Microscopia/tabid/125/Default.aspx&docid=q1l72aAk7WWcwM&imgurl=http://www.ir.v

Microscopio confocal. (Figura 5)

Se encuentra englobado dentro de la microscopia de fluorescencia (10). Permite que el observador visualice las moléculas fluorescentes en un solo plano del foco, por lo cual se crea una imagen transversal del corte mucho más nítido (11). El microscopio incorpora: una fuente de iluminación de gran intensidad y sincrónicas tal como el láser; un juego de diafragmas: uno de iluminación y otro de detección; y un sistema de captación de imagen electrónico (12).

Figura 5. Microscopio confocal. Ariadne Gallardo Figueroa. Recuperada de http://www.google.com.mx/imgres?q=microscopio+confocal+de+barrido&um=1&hl=es&sa=X&biw=1092&bih=533&tbm=isch&tbnid=ivStaY0cGhWxlM:&imgrefurl=http://personales.ya.com/casanchi/ref/mbe01.htm&docid=73F9QWSCOzjMiM&imgurl=http://personales.ya.com/casanchi/ref/meb01.jpg&w=250&h=375&ei=vfJ4T_22CajA2gWR1Mm1Bg&zoom=1&iact=hc&vpx=314&vpy=41&dur=75&hovh=275&hovw=183&tx=100&ty=171&sig=110568796808278234737&page=1&tbnh=152&tbnw=101&start=0&ndsp=12&ved=1t:429,r:2,s:0

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO

Microscopio electrónico de transmisión. (TEM)

El microscopio electrónico de transmisión (figura 6) supone un aumento de poder de resolución al emplear electrones acelerados, cuya longitud de onda es 100,000 veces menor. El funcionamiento de microscopio electrónico es el siguiente: un

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