PCR: LA PROGRESO EN EL ESTUDIO DE LOS FRAGMENTOS DEL MATERIAL GENETICO

PCR: LA PROGRESO EN EL ESTUDIO DE LOS FRAGMENTOS DEL MATERIAL GENETICO

Lili Andrea Hernandez Pineda

En el desarrollo de las tecnologías y los equipos que son utilizados en el marco de la ciencia, los avances han permitido un gran desarrollo investigativo dando solución a muchos de los problemas entorno a la salud pública, si bien estamos por una emergencia de orden nacional de salud en la que se desconocía acerca del virus, pero que gracias a pruebas moleculares se logró conocer acerca de su naturaleza además de su estructura, del mismo modo, para la identificación del COVID-2019, en pacientes fue mediante pruebas de PCR (reacción en cadena de la polimerasa), lo cual es una técnica más factible y determinante, esta prueba molecular la desarrollaron en el año 1986 por el laboratorio CETUR corporatio encargado por el Dr Kary Mullis, esta técnica se fundamenta en la obtención de copias de fragmentos específicos en el materia genético, siendo una técnica rápida y mucho más económica en comparación de otras. La técnica de PCR consiste en un método en el cual se trabaja con las secuencias o transcripciones del material genético in vitro, una reacción automatizada en la se utiliza cebadores (oligonucleótidos y DNAPoliTaq), seguidamente se simplifican velozmente con una alta especificidad y eficacia. Con esta técnica se pueden detectar virus, micoplasmas, hongos, viroides entre otros organismos, sin embargo, al momento del DX puede generar ciertos desconciertos al momento del estudiarlos (interacción patógeno-huesped y vector), no obstante, no deja de ser esta una técnica de análisis rápido y specific para la identificación de DNA viral satélite y recombinante en la aplicación del DNA genómico (Hadidi et al., 2017).

Cuando se desea conocer la naturaleza de un agente desconocido se hace bajo una serie de métodos en los que se replica de manera exponencial (in vitro) su material genético genómico (DNAg) o el DNA complementarie (DNAc), esto con ciclos repetitivos, bajo a condiciones establecidas (temperatura), cuando empieza este proceso en el ciclo las moléculas se duplican, esto a medida en que se dispone el reactivo y agote. Hay iniciadores que dependiendo de la longitud del analito se amplifica y es su caso lo delimitan mediante primers y oligonucleótidos, enfocados en la eficacia del diseño aplicado al momento de realizar esta técnica de reacción de cadena de polimerasa. Cada iniciador este mecanizado para que este no de lugar a la formación de estructuras secundarias en relación con los hibridadores inespecific o ya sea otra parte de la secuencia (Sandberg et al., 2017).

De acuerdo con Jalil et al., (2021), esta técnica de identificación PCR es la más eficaz para la detección del virus del papiloma humano HPV16, lo cual genera infecciones por el VPH!& en el cuello uterino causando carcinomas en las mujeres, los estudios han permitido establecer medidas para la prevención de este tipo de cáncer.

Cada día surgen nuevas estrategias que permiten mejorar la calidad humana, un estudio sobre nanopartículas de oro en una detección colorimétrica de la secuencia de DNA mediante ensambles, con esta técnica se induce a PCR, en presencia de DNA diana, y junto con sondas especificas en los cuales darán un enlace selectivo para la lectura de los segmentos de los A.N,  esta técnica permite cerrar estructuras, teniendo como resultado un método útil y sobre todo universal que permite la detección de moléculas de DNA sensibles y con una que nos minimiza los gastos pues no se requiere de otros procesos adicionales al PCR. Hay que destacar que este método demuestra una detección de LOD, permitiendo analizar de manera más amplia el estudio del DNA diana, y un diagnóstico más eficaz y rápido en tanto a las enfermedades además del estudio de las secuencias de los genes (Zou et al., 2018).

Dentro de las características para la amplificación (in vitro) para la aplicación de reacción en cadena de la polimerasa, se estipulan bajo unas reglas similares al de las del proceso de replicación, esta características se basan en tener una secuencia molde y una complementaria a esta, sintetizando a la cadena antiparalela, teniendo una dirección de 5´a 3´, y requiriendo con ello un nucleotide en el extremo 3´lo cual le va a permitir generar un OH para que dicho nucleótido pueda adicionarse, seguidamente y junto con un enlace de fosfodiéster, ha de conferir el proceso de PCR, todo esto, se requiere de la presencia de DNAg y DNAc para que se de PCR junto con otras proteínas y cofactores permitirán tener una eficaz actividad en tanto a la síntesis de los productos de este procedimiento de PCR. No obstante cada elemento posee una función predeterminada, en tanto la PCR cuantitativa, amplificación y la medición en time real del DNA, los avances en la investigación y en la rama de ciencias biológicas, este tipo de análisis cuantitativos y cualitativos se practican muy constantemente, para el DX de enfermedades de virus o viroides, además de otras ramas aplicadas en el estudio de organismos unicelulares (Li et al., 2020).

El estudio de la DNApoli, Taq DNApoli siendo la enzima más aplicada en las técnicas se reacción en cadena de polimerasa, confiere al estudio de las funcionen en relación con como estas polimerizan una Novo DNA a base de una cadena molde existente, aquello mediante el ciclo que lleva la PCR bajo las condiciones establecidas de temperatura, del mismo modo es requerido que dicha molécula tenga la capacidad de soportarla. Al momento de realizar una amplificación visual de las moléculas de DNA se utiliza un equipo sencillo el cual nos permite ver el PCR, esto con el fin de realizar múltiples pruebas enfocadas en la detención del DNA y el RNA diana, el sistema que se aplica es mediante la expansión del lenguaje genético, este trasfiere energía mediate resonancia de fluorescencia con mezclas de bases naturales (no natural ) entre dinucleotides autoamplicados, purines, donantes y conjugados con moléculas de naturaleza compatibles (aceptor), teniendo una detección visual del nucleótido (polimorfismo), verificando con ello cual de las bacterias de los genes son resistentes a las quinolonas (Yamashige et al., 2018).

La molécula de DNA que será utilizada como molde, permitirá que haya una amplificación desde otras moléculas de DNAg DNA, o ya sea otra molécula la cual permita obtener una muestra bilógica propiciando a unos resultados de calidad optima en los que se permitirá extraer A.N, al momento de producir elementos de PCR es necesario que a partir de estas pueda obtenerse clones relacionados con los vectores, en los que se elaboran consigo locus con cebadores específicos mediante un enlace con PCR, seguidamente cuando ya se obtiene la ampliación esta se somete a purificación, donde se trabaja con enzimas determinadas para la acción, que en lugar dará al extremo con un vector compatible transformando con ello virus. Una reacción  que debe ser retrotranscripción que dará lugar a la conversión de moléculas de RNA a DNAc, siendo la inestabilidad un factor determinante al momento de la presencia del OH en la molécula de la ribosa, cuando ya se obtiene una molécula de DNAc manipulable se puede diferir que es más apta para este proceso, cabe mencionar que cuando se obtiene una amplication de DNAc mediante retritranscriocion, desde el inicio de los ciclos del PCr estas puede  sintetizar al DNAc, seguidamente le permitirá amplificar las sucesiones de la DNAds en ciclos continuos (Green & Sambrook, 2021).

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