PROGRAMA DE BIOLOGÍA. FISIOLOGÍA ANIMAL

UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA

PROGRAMA DE BIOLOGÍA

FISIOLOGÍA ANIMAL

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EFECTO DEL MICROPLÁSTICO SOBRE ALGUNAS VARIABLES FISIOLÓGICAS DEL BIVALVO ESTUARINO Polymesoda artacta

1. Objetivo académico:

-Adiestrarse en algunas técnicas para la determinación de la eficiencia de absorción, tasa metabólica y de excreción de amonio de un animal acuático.

2. Objetivo científico:

-Analizar los posibles efectos del aumento de la temperatura sobre la eficiencia de absorción, tasa metabólica y tasa de excreción de amonio de un animal acuático.

3. Materiales por grupo: 

Fungibles: 13 filtros de fibra de vidrio marcados y pesados ó recipientes de aluminio marcados y pesados, pinzas, 10 animales vivos de igual especie y similar tamaño; estante, 10 acuarios, 10 cámaras de respiración, mangueras, 10 botellas DBO, 10 pipetas pasteur, 10 beakers o frascos, 1 termómetro, 1 refractómetro, 1 probeta de 50 mL, 1 erlenmeyer de 500 mL, 1 bureta, bandejas, guantes quirúrgicos, pipetas de 10 mL, 1 pipeta de 5 mL, pipetas de 1 mL, 10 tubos de ensayo con tapa rosca, 1 gradilla.

Equipos: 1 tanque de 300 L, blower, bomba de succión de agua de mar, balanza analítica, horno, mufla, desecador, bomba de vacío, equipo de filtración, espectrofotómetro y celdillas, nevera.

Reactivos: Silica gel, solución de sulfato manganoso (365 g de sulfato manganoso monohidratado en 1L de agua destilada), solución de ioduro alcalino (500 g de hidróxido de sodio, 300 g de iodato de potasio, 950 mL de agua destilada), ácido sulfúrico concentrado, solución estandarizada de tiosulfato de sodio 0,01 N, solución de almidón al 0.1 % p/v, iodato, agua destilada, HCl al 25%, solución de fenol (10 g de fenol + 100 mL de metanol), solución nitroprusida al 0,5%,  hipoclorito de sodio, solución estándar de sulfato de amonio (1000 μM).

4. Metodología:

Diseño experimental

Con el fin de evaluar el efecto del microplástico sobre la eficiencia de absorción, tasa metabólica o de consumo de oxígeno y tasa de excreción de amonio de los animales, 2 grupos de 2 animales con tamaño similar, serán sometidos, uno a condiciones de microplástico (partículas con diámetro de 10 µm) suspendido en el agua a una concentración de 0.5 mg L-1 y el otro bajo condiciones de ausencia de este material por una semana. Los animales serán mantenidos individualmente en cámaras de 0,8 L con un flujo constante de agua microfiltrada a 1 µm, bajo condiciones de calidad de agua consideradas óptimas para esta especie, tales como una saturación de oxígeno del 90%, temperatura de 27°C, salinidad de 15‰ y una concentración de microalgas Isochrysis galbana de 2,5 x 105 células mL−1. Transcurrido este periodo de aclimatación a las condiciones experimentales, se realizarán determinaciones de la composición orgánica del alimento suministrado, así como de las variables fisiológicas de cada animal experimental.

Laboratorio 1 Determinación de la eficiencia de absorción:

Determinación de la composición orgánica del alimento:

- Tome 3 muestras representativas del alimento suministrado sobre recipientes (filtros de fibra de vidrio) previamente pesados en una balanza analítica y marcados.

-Colóquelos en el horno a 70 °C por 24 horas para que se sequen completamente.

- Cuando saque las muestras del horno colóquelas en un desecador (con la sílica gel previamente secada) por no menos de media hora y péselas nuevamente.

- Coloque las muestras en una mufla a 450 °C por 3 horas, para quemar el material orgánico.

-Sáquelas con pinzas e inmediatamente déjelas enfriar dentro de un desecador por no menos de media hora y vuélvalas a pesar.

- Determine la proporción orgánica (f) del alimento como:        

f = (Wf 70ºC - Wf 450ºC) / (Wf 70ºC-Wf 0)

Donde: Wf 70ºC es el peso del filtro o recipiente contenedor de las muestras luego de ser secado a 70ºC, Wf 450ºC es el peso de los filtros o recipientes contenedores de las muestras luego de ser quemados a 450ºC y Wb 0 es el peso inicial de los filtros o recipientes contenedores de las muestras.

-Calcule el promedio de f en la dieta analizada (esta debe estar entre 0 y 1)

Determinación de eficiencia de absorción

La eficiencia de absorción es la eficiencia con la cual la materia orgánica del alimento ingerido es absorbido a través del sistema digestivo (Widdows, 1985). Se medirá por el método de Conover (1966) que estima la absorción neta (incluye las secreciones metabólicas fecales) y asume que el componente inorgánico del alimento no es absorbido de forma considerable a lo largo del tracto digestivo.

-Luego del periodo de aclimatación, elimine por sifoneo las heces producidas en todos los acuarios.

-Luego de 2 horas, extraiga las heces producidas por los animales en cada acuario usando una pipeta Pasteur y deposítelas en beakers separados y marcados.

-Con ayuda de una bomba de vacío, filtre las heces colectadas sobre filtros de vidrio previamente pesados (Wi) y marcados (un filtro por animal). Tome nota de la correspondencia entre los filtros y los animales experimentales.

-Procéselas para determinar la proporción orgánica de las heces (e) de cada animal de la misma forma como se indicó para hallar el f en el alimento.

e = (Wf 70ºC - Wf 450ºC) / (Wf 70ºC- Wf 0)

-Calcule la eficiencia de absorción como:

EA (%) = (f - e) / ((1 - e) * f) *100

-Calcule la EA promedio para cada tratamiento, debe dar un valor entre 0 y 100.

-Elabore una figura de barras, donde se pueda ver el efecto de la variable independiente estudiada sobre el promedio de la eficiencia de absorción en cada tratamiento.

Laboratorio 2

Determinación de la tasa metabólica

- Coloque cada animal de los grupos experimentales en una cámara de respiración con agua saturada de oxígeno y con las mismas condiciones de temperatura y salinidad mantenidas durante el experimento.

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