PRÁCTICA: Observación de células procariotas (bacterias)

CENTRO UNIVERSITARIO DE LOS LAGOS  [pic 1]

LICENCIATURA EN ING. BIOQUÍMICA BIOLOGÍA CELULAR 2016A  

PROF. Dra. en C. Sofía Loza Cornejo  

De La Riva Contreras Diana, Diaz Villalobos Kevin Eduardo, García García Monserrat y Negrete Ávila Stephanie. 

PRÁCTICA: Observación de células procariotas (bacterias)   

Objetivo:    

Aplicar técnicas sencillas para observación e identificación de la forma de células bacterianas.  

Introducción   

Las bacterias son organismos procariotas, que carecen de núcleo verdadero, una característica que las diferencia de eucariotas, por ejemplo células vegetales y animales. Son unicelulares, visibles sólo a través del microscopio y constituyen uno de los tres dominios en que se dividen los seres vivos. Las bacterias son variables en lo que se refiere a la forma de obtener energía y alimento; se desarrollan en casi todos los ambientes, incluyendo el organismo humano.    

Una forma de clasificación es según su morfología y se clasifican en:  

• Coco: es un tipo morfológico de bacteria. Tiene forma más o menos esférica (ninguna de sus dimensiones predomina claramente sobre las otras).  
• Bacilos: son bacterias que tienen forma de bastón cuando se observan al microscopio. Los bacilos se suelen dividir en:  

1. Bacilos Gram positivos: fijan el violeta de genciana (tinción de Gram) en la pared celular porque carecen de capa de lipopolisacáridos.  

1. Bacilos Gram negativos: no fijan el violeta de genciana porque poseen la capa de lipopolisacárido.  

• Vibrio: es un género de bacterias incluidas en el grupo de las proteobacterias. Varias de las especies de Vibrio son patógenas, provocando enfermedades del tracto digestivo, en especial Vibrio cholerae, el agente que provoca el cólera, y Vibrio vulnificus, que se transmite a través de la ingesta de algunos alimentos.  
• Espirilos: son bacterias flageladas de forma helicoidal o de espiral. Se desplazan en medios viscosos. Su diámetro es pequeño, lo que hace que puedan atravesar las mucosas; por ejemplo Treponema pallidum que produce la sífilis en el hombre. Son más sensibles a las condiciones ambientales que otras bacterias, por ello cuando son patógenas se transmiten por contacto directo (vía sexual) o mediante vectores, normalmente artrópodos hematófagos  

Materiales y Método    

Preparaciones permanentes de bacterias (proporcionada por el profesor)   

Portaobjetos   

Cubreobjetos  

1 Caja de petri  

Piseta con alcohol   

Aceite de inmersión   

Mechero   

Asas de siembra  

Pinzas   

Microscopio óptico  

Preparaciones permanentes de bacterias   

Muestras por equipo:   

1 Muestra de vinagre de alimentos encurtidos   

Cotonetes estériles  

1 Muestra de vegetal no desinfectado  Procedimiento:   

1. Se llevará a cabo la observación de preparaciones permanentes de bacterias que serán proporcionadas por el profesor. Utilice inicialmente los objetivos 10X y 40x; para la observación de detalles celulares agregue una gota de aceite de inmersión sobre el cubreobjetos de la muestra y realice la observación con el objetivo de 100X.  

1. Al terminar la observación de la preparación permanente, proceda a realizar el frotis correspondiente de cada una de las muestras, iniciando con la muestra de vinagre de alimentos encurtidos, para ello, esterilice el asa de siembra en el mechero, deje enfriar y con ella tome un poco de la muestra (fondo del recipiente). Al frotis así realizado se le añade una gota de colorante azul de metileno y una gota de etanol para evitar la saturación de colorante o si éste está concentrado. Se coloca el cubreobjetos correspondiente, se seca el exceso de colorante y se observa la muestra bajo el microscopio utilizando los objetivos 10X y 40X. Para el uso del objetivo de 100X debe utilizar aceite de inmersión).    

1. Proceda a realizar los frotis correspondientes a las otras muestras.   

Resultados  

Anote las observaciones correspondientes para cada una de las muestras observadas. Incluya dibujos esquemáticos o imágenes que expliquen los resultados obtenidos.  

 Conclusiones Cuestionario  

1.- Describe el procedimiento de tinción Gram y su importancia en el estudio de células bacterianas.  

1. Se extiende la muestra recogida (que suele ser líquida o viscosa) en un porta de cristal, y se deja secar al aire.
2. Se aplica metanol al porta; así, las bacterias quedan pegadas en la superficie.
3. Se añade violeta de genciana, un colorante que tiñe todas las bacterias de color púrpura. Se debe dejar durante un minuto para que haga efecto.
4. Se lava la muestra coloreada con agua y se añade alcohol-acetona para desteñir las bacterias que se deben teñir con el violeta de genciana. Es la parte más importante de la prueba, ya que si se deja demasiado tiempo se desteñirían todas las bacterias. Después se lava de nuevo con agua para eliminar el alcohol.
5. Se añade fucsina, otro colorante que tiñe de rosa las bacterias que no se han teñido de color púrpura. Así se pueden observar al microscopio, aunque serán gramnegativas.
6. El microbiólogo estudia la muestra con un microscopio e identifica bacterias teñidas.

2.- Menciona los principales grupos de bacterias de acuerdo a su morfología.  

Antes de que se comience a utilizar el secuenciamiento del ADN, las bacterias eran clasificadas basándose en sus formas y en sus propiedades bioquímicas. Al clasificarlas de acuerdo a su forma o a su estructura morfológica, la mayoría de las bacterias pertenecen a las tres formas básicas y principales: barras, esferas y espirales. Los otros dos tipos, menos comunes, son los de rickettsia y mycoplasma.

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