Practico enzimoligía

INFORME DE PRÁCTICO N° 4

ENZIMOLOGÍA

BIOQUIMICA (BIO005)

Introducción

Las enzimas son biocatalizadores proteicos esenciales para mantener los procesos metabólicos a velocidades compatibles con la vida, contribuyendo además a su regulación, poseen un elevado grado de especificidad y selectividad. Estos procesos pueden verse afectados por factores como temperatura y  pH. (Lehninger, 2009). 
Las enzimas actúan sobre las moléculas conocidas como sustratos y permiten el desarrollo de los diversos procesos celulares. Que sean catalizadores quiere decir que son sustancias que, sin consumirse en una reacción, aumentan notablemente su velocidad. No hacen factibles las reacciones imposibles, sino que solamente aceleran las que espontáneamente podrían producirse. Ello hace posible que en condiciones fisiológicas tengan lugar reacciones que sin catalizador requerirían condiciones extremas de presión, temperatura o pH.
En este práctico se trabajó con la preparación enzimática de amilasa salival, una enzima hidrolasa, que rompe los enlaces glucosídicos α (1-4) de los polisacáridos. A la vez se trabajó con Almidón un polisacárido formado por dos tipos de cadena: amilasa de cadena lineal y amilopectina de cadena ramificada, un método de reconocimiento de este polisacárido se debe a la coloración, dando un color azul intenso en presencia de yodo, por lo que la hidrólisis enzimática del almidón se puede determinar por la pérdida de este color azul de una mezcla de reacción.
A modo de experimento se realizó: El efecto de la temperatura sobre la hidrolisis enzimática del almidón y el efecto del pH de la amilasa salival.

Objetivos

• Analizar la actividad enzimática en muestras biológicas.
• Predecir el efecto de las variaciones de pH y temperatura sobre la actividad enzimática.

Procedimiento experimental - Materiales y métodos

ACTIVIDAD 1: Efecto de la temperatura sobre la hidrolisis enzimática del almidón.

En primer lugar se numeraron cuatro tubos de ensayo, añadiéndole a cada uno:
2 mL de la preparación enzimática
1 mL de la solución de cloruro de sodio 0,03 M
1 mL de la solución tampón fosfato pH 7,0  
2 mL de solución de almidón 1% m/v
Posteriormente se agitó suavemente y se incubó durante 15 minutos en la siguientes condiciones:
Tubo 1: 0°C (sobre hielo).
Tubo 2: 37°C en un baño termorregulador.
Tubo 3: 100°C (baño maría)
Tubo 4: Temperatura ambiente (sobre el mesón)
Una vez transcurridos los 15 minutos se le agregó a cada tubo una gota de lugol, se mezcló y se observaron los resultados.

ACTIVIDAD N° 2: Efecto del pH sobre la actividad de la amilasa salival.

Se numeraron cinco tubos de ensayo a los cuales se la agregó a cada uno:
2 mL de preparación enzimática
1 mL de solución de cloruro de sodio 0,03 M  
2 mL de solución de almidón 1% m/v
posteriormente se le adicionó lo siguiente:
Tubo 1: 1 mL de tampón fosfato pH 2,0
Tubo 2: 1 mL de buffer pH 5,0
Tubo 3: 1 mL de buffer pH 7,0
Tubo 4: 1 mL de buffer pH 10,0
Tubo 5: 1 mL de buffer pH 12,0

Luego se mezcló sin agitar y se incubo a temperatura ambiente durante 20 minutos, una vez transcurrido este tiempo se le adicionó una gota de lugol, se mezcló y se observaron los resultados.

 RESULTADOS

Actividad 1: Efecto de la temperatura sobre la hidrolisis enzimática del almidón.

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