Pruebas PCR

PCR

Es una técnica de biología molecular desarrollada en 1986 porKary Mullis,1 cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADNparticular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde. Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus obacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado.
El diagnóstico de enfermedades hereditarias presentes en el genoma es un proceso largo y complicado que puede acortarse significativamente gracias a la PCR. Cada uno de los genes prueba se pueden amplificar mediante sus correspondientes cebadores y posteriormente secuenciar para detectar la existencia de mutaciones.

RFLPS

Mediante cortes de determinadas secuencias del ADN con enzimas que reconocen específicamente tales sitios se generan fragmentos cortos y largos (fragmentos de restricción) que hibridan con sondas de ADN construidas específicamente para reconocerlos. En la población algunas secuencias de ADN contienen sitios particulares de restricción, mientras que en otras homólogas faltan a causa de la mutación. Los individuos que presentan un sitio de restricción determinado en ambas secuencias homólogas serán homocigotos y generarán una sola banda electroforética, la cual puede ser larga o corta. Los individuos con un sitio de restricción presente en un cromosoma pero no en el homólogo serán heterocigotos y generarán dos bandas electroforéticas, una larga y una corta. Debido a que con los RFLPs podemos diferenciar los individuos homocigotos de los heterocigotos concluimos que estos polimorfismos son codominantes.

SEQ

Poderosa herramienta para estudios de genómica estructural y funcional, siendo capaces de secuenciar organismos completos en cosa de horas.
La secuenciación de novo permite la caracterización de las secuencias nucleotídicas de genomas no descritos hasta la fecha, es decir, un organismo donde no existe una secuencia de referencia disponible. La tecnología de secuenciación masiva ofrece una posibilidad real y asequible de obtener datos de la secuencia completa de un genoma facilitando el diseño de estudios moleculares con fines científicos y biotecnológicos.
Se conoce como “RNA-Seq” a la secuenciación masiva de Cdna de una muestra cuyo objetivo final es la obtención global sobre el contenido de ARN, incluyendo mRNAs, rRNA, tRNA y otros RNAs no codificantes de forma rápida. En esta técnica se investigan sólo aquellas regiones del genoma que se están transcribiendo y proporciona una forma eficiente de medir niveles de expresión génica, buscar genes transcritos, recomponer transcritos completos (sin necesidad de clonar antes el cDNA), identificar eventos de splicing alternativo y variaciones génicas de un solo nucleótido (SNVs) de manera simultánea reduciendo el precio por muestra.

Northem-blot

Es una técnica de laboratorio que se utiliza para detectar una secuencia de ARN específica en un muestra de sangre o de tejido. Las moléculas de ARN en una muestra se separan por tamaño mediante electroforesis en gel. Los fragmentos de ARN son transferidas del gel a la superficie de una membrana. La membrana se expone a una sonda de ADN marcada con una etiqueta radiactiva o química. Si la sonda se une a la membrana, entonces la secuencia complementaria de ARN está presente en la muestra. Se realiza en varias etapas, y se puede usar para comparar cantidades relativas de distintas formas de ARN, detectar el tamaño de un ARN dado y localizar distintas formas de ARN.

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