Reporte Tipos de PCR

Universidad del Valle de México

Reporte Tipos de PCR[pic 1]

Samuel Juárez Palacios, Kendra Alejandra Moronatti García,  Iolani Miranda del Castillo, Carla Novoa Castillo,

 y María Fernanda Aguilar Ruíz

Asignatura: Microbiología Industrial.

Fecha de entrega: 16 de agosto de 2021

1. Electroforesis en gel de campos pulsados

La electroforesis es una técnica para separación de biomoléculas según su movilidad y naturaleza (generalmente ácidos nucleicos o proteínas) en un campo eléctrico sobre una matriz porosa, cuya composición depende de la biomolécula a analizar.

La electroforesis de campo pulsado se realiza cambiando alternativamente el campo eléctrico entre pares de diferentes electrodos de azimut espacial, cambiando las direcciones de las moléculas de ADN de los millones de bases y pasando los poros del gel de agarosa a diferentes tasas de migración para separar el ADN.

Fundamento: El sistema de electroforesis de campo pulsado se usa principalmente para la separación y análisis de ADN genómico, que puede detectar y aislar moléculas de ADN de tamaño 100 bp-6Mb, principalmente en la separación de ADN cromosómico; Construcción, identificación y análisis de bibliotecas de genomas de grandes fragmentos. investigación transgénica; Identificación de microorganismos patógenos, trazabilidad; Daño a la radiación del ADN y reparación; Apoptosis celular y otros campos.

Aplicación: Esta técnica es adecuada para la resolución de ADN de tamaño cromosómico. La alternancia del campo eléctrico entre diferentes pares de electrodos provoca reorientaciones de fragmentos grandes de ADN que migran a diferente velocidad en el gel de agarosa. También es una técnica que permite la separación de fragmentos pequeños, desde 100 bases. La técnica se emplea fundamentalmente para el tipaje de microorganismos, por ejemplo la determinación de cepas patógenas.

1. Microarreglos

La tecnología de microarreglos es una herramienta poderosa en el campo de la investigación biomédica, debido a que permite analizar diferentes tipos de muestras biológicas (tejidos, proteínas y material genético) y miles de moléculas de manera simultánea por ensayo, a diferencia de lo que ocurre con otras técnicas de biología molecular (RT-PCR, PCR, Western blot, Northern blot, Southern blot) en las cuales sólo se pueden analizar un número limitado de moléculas por ensayo. La versatilidad de esta técnica permite utilizarla en estudios de dosis-respuesta, para establecer perfiles de expresión diferencial de genes en condiciones experimentales distintas (enfermedades, tratamientos, etc.), en el análisis de polimorfismos, presencia de mutaciones, mutaciones puntuales, identificación de blancos terapéuticos, etc.

Fundamento: Este tipo de ensayos proporcionan información muy valiosa en diferentes campos de la investigación biomédica, pero el desconocimiento de las aplicaciones y los elevados costos de las pruebas hacen que algunos investigadores no utilicen esta tecnología. Un microarreglo se encuentra integrado por dos partes, el material biológico o sintético denominado como prueba y el soporte sólido en el cual se inmovilizan o absorbe el material biológico; este material puede ser de distintas naturalezas; entre los materiales más usados encontramos plástico, vidrio, gel, silicón, membranas porosas y oro.

Aplicación: Esta nueva tecnología permite el diagnóstico de enfermedades y una mejor comprensión de cómo se ve modificada la expresión génica bajo distintas condiciones médicas. Además, permite la comparación de un tejido control y un tejido tratado con cierta droga, con el fin de estudiar los efectos de un posible tratamiento médico.

1. Western blot

Western blot es una técnica de laboratorio utilizada para detectar una proteína específica en una muestra de sangre o tejido. El método implica el uso de electroforesis en gel para separar las proteínas de la muestra. Las proteínas separadas se transfieren del gel a la superficie de una membrana. La membrana se expone a un anticuerpo específico contra la proteína en estudio. La unión del anticuerpo se detecta usando un marcador radiactivo o químico.

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