Submódulo I Emplea técnicas clásicas de análisis cuantitativos con base a normas

Centro de Bachillerato Tecnológico
Industrial y servicios N° 93[pic 1]

Integrantes: Cecilia Del Carmen Pérez González
                     

Submódulo I
Emplea técnicas clásicas de análisis cuantitativos con base a normas

Maestro: Julián Reyes Mejías

Trabajo: Tinciones

4° “B” Laboratorista Químico

T/V

H. Cárdenas, Tabasco a 30/Abril/2016

Índice

TINCION        3

Historia        3

Primeras Tinciones        4

Clasificación de las Tinciones        10

Conclusión        13

TINCION

Historia

En 1884, Hans Christian Gram, un Médico danés que laboraba en Berlín, accidentalmente descubrió un método para teñir y diferenciar bacterias. Empleaba cristal violeta como colorante y una solución yodada potásica como mordente. Mientras examinaba preparaciones de tejido pulmonar de pacientes que habían muerto por neumonía, descubrió que el colorante era retenido por algunas bacterias y otras permanecían incoloras después de lavar el frotis con etanol y agua. Clasificó a las primeras como Gram-positivas y Gram-negativas a las segundas.[pic 2][pic 3]

Posteriormente  Carl Weigert  introdujo la modificación por la cual se incorporaba safranina como colorante de contraste al método facilitando la diferenciación entre positivas (violeta) y negativas (rosa/naranja). 

Primeras Tinciones

Tinción de Gram: Tinción de Gram diferencia bacterias por las propiedades físicas de sus paredes celulares y química mediante la detección de peptidoglicano, que está presente en una capa espesa en las bacterias Gram positivas. Unos resultados Gram positivos en un color púrpura/azul, mientras que un resultado Gram negativos en color rosa/rojo.

La tinción de Gram es casi siempre el primer paso en la identificación de un organismo bacteriano. Mientras que la tinción de Gram es una herramienta de diagnóstico valiosa, tanto en entornos de investigación clínica y, no todas las bacterias pueden ser clasificados definitivamente por esta técnica. Esto da lugar a grupos de Gram-variables y Gram-indeterminado así.

Utilización

Tinción de Gram no se utiliza para clasificar las arqueas, anteriormente arqueobacterias, ya que estos microorganismos producen muy diversas respuestas que no siguen sus grupos filogenéticos.

La tinción de Gram no es una herramienta infalible para el diagnóstico, identificación, o filogenia, y es de uso muy limitado en la microbiología ambiental. Se ha sustituido en gran medida por las técnicas moleculares, incluso en el laboratorio de microbiología médica. Algunos organismos son Gram-variable, algunos organismos no son susceptibles a la mancha ya sea utilizado por la técnica de Gram. En un moderno laboratorio del medio ambiente o la microbiología molecular, la mayoría identificación se realiza utilizando secuencias genéticas y otras técnicas moleculares, que son mucho más específico e informativo que la tinción diferencial.[pic 4]

La tinción de Gram ha demostrado ser como una herramienta de diagnóstico eficaz como la PCR. 

Método de Uso

Las bacterias Gram-positivas tienen una pared celular similar a una malla gruesa hecha de peptidoglicano, que se tiñe por púrpura violeta de cristal, mientras que las bacterias Gram-negativas tienen una capa más delgada, que se tiñe de color rosa por el contador-mancha. Hay cuatro pasos básicos de la tinción de Gram:

-La aplicación de una tinción primaria a un frotis fijo de calor de un cultivo bacteriano. Fijación de calor mata algunas bacterias, pero se utiliza sobre todo para fijar las bacterias a la diapositiva para que no se enjuagan durante el procedimiento de tinción.

-La adición de yodo, que se une a cristal violeta y se atrapa en la célula,

-Decoloración rápida con alcohol o acetona, y

-Contra tinción con safranina. Carbol fucsina es a veces sustituido por safranina ya que teñirá más intensamente bacterias anaerobias, pero es mucho menos comúnmente empleada como contra tinción.

Crystal disocia violeta en soluciones acuosas en iones CV y cloruro. Estos iones penetran a través de la pared celular y la membrana celular de las células tanto Gram-positivas y Gram-negativas. El CV de iones interactúa con los componentes de carga negativa de las células bacterianas y las células manchas de color púrpura.

Yodo interactúa con CV y forma grandes complejos de cristal violeta y yodo dentro de las capas interior y exterior de la célula. El yodo se refiere a menudo como un mordiente, pero es un agente de captura que impide la eliminación de la CV-complejo I y, por lo tanto, el color de la celda.

Cuando se añade un decolorante, tal como alcohol o acetona, que interactúa con los lípidos de la membrana celular. Una célula Gram-negativa perderá su lipopolisacárido membrana externa, y la capa de peptidoglicano interior está expuesto a la izquierda. Los complejos CV-I se lavan de la célula de Gram-negativa, junto con la membrana externa. En contraste, una célula Gram-positiva se deshidrata a partir de un tratamiento con etanol. Los grandes complejos CV-I quedan atrapados dentro de la célula Gram-positivos debido a la naturaleza de múltiples capas de su peptidoglicano. La etapa de decoloración es crítica y debe ser programado correctamente; la tinción de cristal violeta se eliminará de ambas células Gram-positivos y negativos si el agente decolorante se deja durante demasiado tiempo.

Después de la decoloración, la célula Gram-positivas sigue siendo morada y la célula Gram-negativas pierde su color púrpura. Contra tinción, que suele ser cargado positivamente safranina o fucsina básica, se aplica última para dar decolora las bacterias Gram-negativas un color rosa o rojo.

Algunas bacterias, después de teñir con la tinción de Gram, producen un patrón de Gram variable: una mezcla de células de color rosa y morado se ven. El Actinomyces géneros, Arthobacter, Corynebacterium, Mycobacterium, Propionibacterium y tienen paredes celulares particularmente sensibles a la rotura durante la división celular, lo que resulta en la tinción de Gram-negativos de estas células Gram-positivas. En los cultivos de Bacillus, Butyrivibrio, y Clostridium, una reducción del espesor de peptidoglicano durante el crecimiento coincide con un aumento en el número de células que mancha Gram-negativas. Además, en todas las bacterias tiñeron utilizando la tinción de Gram, la edad del cultivo puede influir en los resultados de la mancha.[pic 5]

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