Taller de núcleo

INTRODUCCIÓN

Las enzimas son grandes proteínas que aceleran las reacciones químicas. En su estructura globular, se entrelazan y se pliegan una o más cadenas polipeptídicas, que aportan un pequeño grupo de aminoácidos para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el sustrato, y donde se realiza la reacción. Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no encajan con exactitud. Según su función, las enzimas se pueden clasificar en Oxidorreductasas, Transferasas, Hidrolasas, Liasas, Isomerasas, Ligasas.

La actividad enzimática se ve afectada por diferentes factores, tales como la concentración del sustrato, concentración de la enzima, temperatura, pH y presencia de cofactores.

Con la actividad planteada podremos observar de forma práctica la actividad proteolítica ante diferentes cambios de temperatura, y compuestos.

Se llama desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras de orden superior (secundaria,terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura tridimensional fija. Los agentes que provocan la desnaturalización de una proteína se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes físicos (calor) y químicos (detergentes, disolventes orgánicos, pH,fuerza iónica). En algunos casos el fenómeno de la desnaturalización es reversible.

Pero no todas las proteínas reaccionan de igual forma ante un cambio en el medio donde se encuentra disuelta. En algunos casos, la desnaturalización conduce a la pérdida total de la solubilidad, impidiendo así su renaturalización, pero en otros la proteína puede recuperar sus características iniciales.

MARCO TEÓRICO

Las enzimas son polímeros de aminoácidos importantes para la regulación química de las células y los organismos gracias a su capacidad de acelerar reacciones químicas. La catálisis es esencial para hacer que muchas reacciones bioquímicas de importancia crucial se produzcan en condiciones fisiológicas a velocidades útiles.

Un catalizador reduce la barrera de energía para una reacción, con lo que aumenta la fracción de moléculas que tienen la energía suficiente para alcanzar el estado de transición y hacer que la reacción vaya más rápida en ambas direcciones. Sin embargo, la presencia de un catalizador no tiene efecto alguno sobre la posición de equilibrio, puesto que la diferencia en las magnitudes de la barrera en las dos direcciones es exactamente la misma en presencia o no del catalizador.Existe una gran cantidad de proteínas diferentes que actúan como enzimas, por tal estas se dividen en seis grandes clases son:

Oxidorreductasas que catalizan reacciones de oxidación-reducción.

Transferasas que catalizan transferencias de grupos funcionales de una molécula a otra.

Hidrolasas que catalizan rupturas hidrolíticas.

Liasas que catalizan eliminaciones de un grupo o adiciones de un grupo a un doble enlace, u otras rupturas que implican un reordenamiento electrónico.

Isomerasas que catalizan re ordenamientos intramoleculares.

Ligasas que catalizan reacciones en las que se unen dos moléculas.

En la práctica se utilizaron diversas enzimas con el fin de observar su actividad enzimática, estas fueron:

Bromelaina: enzima o fermento de acción proteolítica, capaz de romper las moléculas de proteína dejando libres los aminoácidos que las forman, esta se encuentra presente en la piña.

Papaína: proteína presente en toda la planta de la papaya compuesta por 212 aminoácidos, esta además de hidrolizar proteínas, también lo hace con pequeños péptidos, aminas, ésteres, carbohidratos y grasas.

MATERIAL POR GRUPO

• Gradilla (1)

• Tubos de ensayo (16)

• Películas fotográficas (4)

• Hoja tamaño carta con 4 círculos marcados como A, B, C y D. Cada hoja debe estar marcada con el número del grupo (1)

• Tubo cónico de 15mL con 4mL de agua destilada (1)

• Tubo cónico de 15mL con 4mL de bromelaína (1)

• Tubo cónico de 15mL con 4mL de papaína (1)

• Tubo cónico de 15mL con 13mL de solución de gelatina 5 % (1)

• Tubo cónico de 15mL con 13mL de solución de albúmina de huevo 5 % (1)

• Tubo cónico de 15mL con 6mL de solución de hidróxido de sodio [NaOH] 5 % (1)

• Tubo cónico de 15mL con 6mL de solución de sulfato cúprico [CuSO4] 1 % (1)

• Tubo cónico de 50mL con 25mL de leche líquida (1)

OBJETIVO GENERAL

El objetivo de este laboratorio es relacionar algunos de los conceptos y técnicas aprendidos en clase sobre la unidad enzimática, aplicando técnicas de identificación de procesos catalizados por enzimas, y otros en las cuales estas no intervienen, sometiendo las muestras a diferentes temperaturas diferenciando así los resultados y el efecto de la temperatura en ciertas enzimas, resaltando la importancia de la presencia de estas a unas condiciones adecuadas.

OBJETIVO ESPECÍFICO

Observar la actividad proteolítica sobre:

Películas fotográficas

Gelatina comercial

Albumina de huevo

Leche

METODOLOGÍA Y RESULTADOS

ACTIVIDAD PROTEOLÍTICA SOBRE PELÍCULAS FOTOGRÁFICAS:

1.1 Dibujamos 4 círculos en una hoja de papel (carta) y los marcamos como A, B, C y D.

1.2 Tomamos 4 recortes de película fotográfica, pusimos uno en cada círculo dibujado en la hoja y realizamos los tratamientos de la siguiente forma:

Recorte A: 1 gota de agua destilada.

Recorte B: 1 gota de bromelaína.

Recorte C: 1 gota de papaína.

1.3 Dejamos actuar a temperatura ambiente por 2 horas en un lugar libre de flujos de aire y retirado del sitio de trabajo para evitar confusiones accidentales.

1.4 Pasadas las 2 horas, en las cuales desarrollamos los demás experimentos, enjuagamos cada recorte de película fotográfica con agua de la llave, frotando suavemente con los dedos.

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