TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS

COLEGIO DE ESTUDIOS CIENTIFICOS Y TECNOLÓGICOS DEL ESTADO DE HIDALGO

PLANTEL TETEPANGO

“JOSE MARIA MORELOS Y PAVON”

CICLO ESCOLAR FEBRERO 2015 - JULIO 2014

MODULO III

EJECUTA MÉTODOS DE ANÁLISIS CUANTITATIVOS QUÍMICOS Y MICROBIOLÓGICOS CON BASE EN LAS NORMAS

SUBMÓDULO II

“REALIZA ANALISIS CUANTITATIVOS EMPLEANDO METODOS INSTRUMENTALES "

Nombre del alumno: Elí García Godoy

No. de equipo: 1

No. de Lista: 15

Grupo: 4 ° "C"

Nombre del docente: Ing. Ana Laura García Cruz

Práctica No. 8

“TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS”

Fecha: 22 de mayo del 2015

Objetivo:

El alumno conocerá y analizará la separación de colorantes mediante la aplicación de técnicas cromatograficas tales como cromatografía en columna, en papel y en capa fina, asimismo, el alumno podrá saber cómo se controla y determina el proceso de separación de mezclas de substancias.

Contextualización:

Técnicas cromatograficas

Cromatografía

La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies químicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.

En todas las separaciones cromatográficas la muestra se disuelve en una fase móvil, que puede ser un gas un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie sólida. Las fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con más fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los componentes que unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

En el laboratorio de técnicas instrumentales de la Universidad de Valladolid disponemos de las siguientes técnicas cromatográficas:

Cromatografía de líquidos HPLC

Principios de la técnica

En la cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna que contiene a la fase fija. La separación cromatográfica en HPLC es el resultado de las interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y estacionaria

A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no está limitada por la volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra.

La HPLC es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturales lábiles, materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. Con una fase móvil líquida interactiva, otro parámetro se encuentra disponible para la selectividad, en adición a una fase estacionaria activa.

La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y más posibilidades para la separación.

HPLC preparativa

Es la técnica escogida para aislamiento y purificación de productos de valor en las industrias químicas y farmacéuticas así como en la biotecnología y la bioquímica. La cromatografía preparativa comprende un amplio rango de aplicaciones, desde el aislamiento de 1µg de muestra para identificación espectroscópica hasta el aislamiento de un compuesto puro de una mezcla de 100 g.

Aplicaciones

Campos de Aplicación de HPLC

 Fármacos: Antibióticos, sedantes esteroides, analgésicos

 Bioquímica: Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos

 Productos de alimentación: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos

 Productos de la industria química: Aromáticos condensados, tensoactivos, propulsores, colorantes

 Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB

 Química forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcóticos

 Medicina clínica: Ácidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina, estrógenos.

Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa

 Separación y purificación de metabolitos

 Separación y purificación de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de orina

 Purificación y separación de enantiómeros

 Purificación de compuestos naturales

 Purificación y caracterización de enzimas y proteínas

Cromatografía de gases

Principios de la técnica

En cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil que es un gas inerte, y a diferencia de la mayoría de los tipos de cromatografía, la fase móvil no interacciona con las moléculas del analito; su única función es la de transportar el analito a través de la columna.

Respecto a la cromatografía líquida, la cromatografía de gases tiene la ventaja de disponer de detectores mucho más universales (por ejemplo, el de ionización de llama). Además, para numerosas aplicaciones, los métodos son más simples, más rápidos y más sensibles que los correspondientes a la cromatografía líquida de alta resolución. La instrumentación requerida para cromatografía de gases también es mucho más sencilla y económica que la empleada en HPLC. Sin embargo, en cromatografía de gases, la influencia de la temperatura sobre la distribución del equilibrio es considerable, a diferencia de la cromatografía líquida. Por ello, la cromatografía de gases presenta limitaciones en tres casos:

 compuestos poco volátiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.

 compuestos sensibles a una elevación de la temperatura incluso moderada (determinados compuestos de interés biológico)

 compuestos que se encuentran en forma iónica (puesto que son e n general poco volátiles)

Por esta razón, la cromatografía de gases se emplea cuando los componentes de la mezcla problema son volátiles o semivolátiles y térmicamente estables a temperaturas de hasta 350-400ºC. En cambio, cuando los compuestos a analizar son poco volátiles

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