Técnicas De Obeservación De Microrganismos

República Bolivariana de Venezuela

Universidad Nacional Experimental del Táchira

Decanato de Docencia

Departamento de Ingeniería Ambiental

INFORME Nº 3

“Técnicas de observación de Microorganismos”

Integrantes:

Medina, Yaritza CI: 20479501

Eustaquio, Lynda CI: 22677188

Introducción

La observación de bacterias con microscopía óptica puede realizarse por diferentes procedimientos como lo son la observación directa de microorganismos a través del examen al fresco o examen de gota pendiente los cuales proporcionan información sobre la morfología, tamaño, y movilidad de las bacterias; así como también el tratamiento con colorantes mediante la técnica de tinción el cual es un método sencillo para incrementar el contraste entre la célula y su entorno y por lo tanto contribuye a mejorar la imagen observada. Todas las tinciones se realizan a partir de suspensiones de microorganismos extendidas en un portaobjetos (frotis), secadas y fijadas. La fijación es un procedimiento que permite preservar estructuras celulares, se puede llevar a cabo con diferentes tratamientos: fijación por calor o fijación química. La fijación por calor es la más utilizada para la observación de bacterias.”Este procedimiento consiste en pasar el portaobjetos, con la suspensión bacteriana extendida y seca, a través de una llama de un mechero. La fijación por calor preserva la morfología externa de los microorganismos pero no las estructuras internas. La fijación química con agentes como etanol, formaldehído y ácido acético entre otros muchos, se utiliza para preservar las estructuras celulares”. [1].

Existen varios tipos de tinciones, como, la tinción simple y la tinción diferencial o de Gram; para la tinción simple se utiliza un solo colorante y sólo nos permite observar la forma, el tamaño y el tipo de agrupación de las células, para la tinción de Gram Intervienen dos o más colorantes y cada uno diferencia una estructura. “Esta tinción distingue entre dos amplios grupos de bacterias según la composición de la pared celular; las Gram (-) que no retienen el complejo cristal violeta-lugol después de la decoloración con alcohol y aparecen teñidas de rojo, y las Gram (+) que sí lo retienen y aparecen teñidas de azul oscuro”. [2]

Resultados obtenidos.

1. Examen al fresco:

Microorganismo: agua residual (motilidad)

Morfología: bacilos

Magnificación: 400X

2. Coloración Simple:

Microorganismo:sarcina

Morfología: bacilos

Agrupación:staphylobacilos

Magnificación:400X

3. Coloración Gram:

Microorganismo: Sarcina

Morfología: bacilos

Agrupación: staphylobacilos

Afinidad tintorial: Gram (-)

Magnificación:400X

4. Glucógeno:

Microorganismo: levadura verde

Morfología: staphylococos

Magnificación:400X

5. Volutina:

Microorganismo: B. cereus

Morfología: cocos

Agrupación: streptococos

Magnificación:400X

6. Cápsulas:

Microorganismo: sarcina

Morfología:bacilos

Agrupación: streptopbacilos

Magnificación:400X

Discusión de resultados

Para distinguir los microorganismos se llevan a cabo una serie de técnicas que permiten visualizar detalladamente sus estructuras y así lograr reconocer el color, tamaño, forma, tipo de agrupación y presencia de motilidad del microorganismo que se esté estudiando, para este caso se emplearon métodos diferentes, desde el exámen al fresco hasta técnicas de tinción;los exámenes en fresco permiten visualizar los microorganismos vivos, sin fijarlos ni teñirlos, de allí se obtienen características básicas como la motilidad y morfología. En tal efecto de acuerdo a los resultados, para este examen se logró observar a través del microscopio movimiento de un flagelo contenido en el agua residual evidenciando motilidad;si bien es cierto que la mayoría de las bacterias son transparentes se suele recurrir al uso de tinciones simples y diferenciales que se aplican dependiendo de lo que se busca estudiar, por ejemplo una tinción simple sirve para apreciar la forma y el tamaño, no obstante, no muestran detalles finos de la estructura interna. “El estudio microscópico de las bacterias se facilita notablemente al tratarlas con colorantes o tintes. Con más facilidad se aprecian la forma y tamaño relativo de los microorganismos teñidos; el colorante también permite la observación de ciertas estructuras celulares”. (Carpenter, 1969). Durante la sesión práctica se utilizaron dos técnicas de coloración, para las cuales previamente se preparó y fijó el frotis tomando una muestra de un medio de cultivo sólido en placa de sarcina. La primera, una tinción simple empleada con azul de metileno, un colorante que actúa rápido sobre todas las células bacterianas,indicó presencia de bacilos agrupados yotros dispersos en los que se apreció más su forma. Seguidamente se realizó la tinción de Gram; donde las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que se fijan de acuerdo con su propia constitución química. Su utilidad práctica es indiscutible en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología, las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, y otros) se basan justamente en la tinción de Gram [3]. La técnica consiste en dos tinciones simples sucesivas, separada por una fase de decoloración, que permite diferenciar las bacterias que retienen el primer color (Gram (+)) de las que no lo retienen (Gram (-)). Esta diferencia en comportamiento refleja diferencias estructurales y fisiológicas entre ambos grupos de bacterias.En el caso de la práctica con la Sarcina, observando en el microscopio ya en el objetivo de inmersión se apreciaron bacilos agrupados,cuya agrupación se determinó en staphylobacilos

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