Verificación Del Funcionamiento De Un Espectrofotómetro
Enviado por IxWOLFxI • 23 de Septiembre de 2013 • 1.255 Palabras (6 Páginas) • 2.581 Visitas
Instituto Politécnico Nacional.
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas.
Ingeniería Bioquímica.
Cuarto Semestre.
Laboratorio de Métodos de Análisis.
Verificación del funcionamiento de un espectrofotómetro
Práctica de Laboratorio.
Objetivos
Evaluar el rendimiento instrumental de un espectrofotómetro.
Verificar la exactitud de la escala de longitud de onda, la presencia de radiación dispersa, el ancho de banda, la exactitud fotométrica, la proporcionalidad de respuesta y el rendimiento global del instrumento.
Resultados
Los siguientes resultados se obtuvieron para las pruebas realizadas en el espectrofotómetro número 10.
Exactitud de la escala de longitud de onda.
Método del filtro de tierras raras (didimio) Espectro de transmisión
Longitud de onda (nm) %T Longitud de onda (nm) %T
400 19 500 50
410 32 510 59
420 46 520 52
430 56 530 36
440 54 540 26
450 46 550 32
460 45 560 54
470 48 570 69
480 45 580 53
490 43 590 25
A continuación se muestra el espectro de transmisión obtenido:
De color verde podemos ver los picos del espectro y con color rojo los valles que este presenta, si lo comparamos con el espectro teórico o del fabricante es particularmente similar ya que coincide en todos los puntos exceptuando el primer valle y primer pico con una variación en ambos de 10 nm por debajo del valor de fábrica.
Método de la solución estándar (NiSO46H2O al 20%)
Longitud de onda (nm) %T Longitud de onda (nm) %T
380 10 490 72
390 3 500 83
400 1.5 510 90
410 1 520 92
420 2 530 95
430 3 540 87
440 8 550 84
450 21 560 80
460 36 570 76
470 47 580 71
480 68 590 62
El valor máximo de porciento de transmitancia fue dé %T = 95 a una longitud de onda de 530 nm como se muestra en la tabla con color verde y en el espectro.
Las ventajas de los métodos que se emplearon son:
Los resultados fueron muy rápidos.
Los materiales como los filtros y el NiSO46H2O al 20%, fueron fáciles de emplear así como reutilizables, lo que hace los métodos baratos.
L a técnica es muy simple y sencilla, no se necesita un manejo especial del espectrofotómetro.
Las lecturas tomadas tienen estabilidad en la escala por lo que no hay tanto error al tomar lecturas.
Los espectros en ambos son muy similares a los del fabricante.
Las desventajas son:
El filtro de didimio aunque es reutilizable, es frágil y muy difícil de conseguir.
La concentración del NiSO46H2O al 20% se ve afectada con su uso ya que se va contaminando.
Se debe tener mucho cuidado que el filtro no esté rayado o las celdas con las que se mide no estén maltratadas.
Proporcionalidad fotométrica
Tabla de proporcionalidad entre A y λ para NiSO46H2O al 20%.
Empleando los valores de %T de la tabla anterior y con la formula:
A=2-log(%T)
Ejemplo:
A_530=2-log(95)=0.0222
Longitud de onda (nm) Absorbancia
530 0.0222
540 0.0604
550 0.0757
560 0.0969
570 0.1191
Calculando la ecuación tenemos que:
y = 0.0023x - 1.1918 con; b = -1.1918, m=0.0023 y su coeficiente de correlación es:
r² = 0.9775
Según la referencia este coeficiente es aun más bajo que el que se brinda (o.9809) aunque se especifica que se acepta variación. Y con base en este coeficiente podemos concluir que la relación entre la longitud de onda y la absorbencia en este intervalo es estrecha. Y que la relación existente entre ellos es que al aumentar la longitud de onda en el espectro, aumentara el valor de la absorbencia de manera proporcional.
Luz dispersa
Todo lo referente a resultados y conclusión de esta parte se encuentra en la Tabla de Resumen de resultados de evaluación del funcionamiento del espectrofotómetro.
Ancho de Banda
Todo lo referente a resultados y conclusión de esta parte se encuentra en la Tabla de Resumen de resultados de evaluación del funcionamiento del espectrofotómetro.
Si el ancho de banda disminuye provca una disminución en los mínimos de transmisión
Exactitud Fotométrica
Otros métodos para verificar la exactitud en el UV-VIS son:
Soluciones de dicromato de potasio en HClO4 0.001Ncon absorbencia certificada a 340nm.
Soluciones de p-nitrofenol en NaOH 0.1N con Absorbancia de 405nm.
Soluciones de cianmetahemoglobina con absorbencia a 540nm.
Si la escala de longitud de onda está mal calibrada, la exactitud será nula, debido a que se emplean estándares, es decir, que a cada longitud de onda conocemos el valor de %T y A, si las longitudes están mal, las lecturas serán no validas.
Tabla Exactitud Fotométrica. Método del NiSO46H2O al 20%.
Longitud de onda
Parámetro 400 nm 510 nm
Absorbencia esperada 1.6990 0.0680
Tolerancia aceptada ±0.0850 ±0.0034
Absorbencia medida 2 0.0506
No hay exactitud fotométrica ya que ninguno de los valores medidos entra dentro del marco de referencia.
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