Volumetria

1. Difusion:

Fundamento: el método de disco difusión consiste en depositar en la superficie de una

placa de agar MH previamente inoculada con el microorganismo, discos de papel de filtro impregnados con los diferentes antibióticos. Tan pronto el disco impregnado en antibiótico se pone en contacto con la superficie húmeda del agar, el filtro absorbe agua y el antibiótico difunde por el agar, formándose un gradiente de concentración. Transcurridas 18 a 24 horas de incubación, los discos pueden o no aparecer rodeados por una zona de inhibición de crecimiento bacteriano.

Dilusion:

consiste en exponer a las cepas a estudiar a diferentes concentraciones de antimicrobianos, en diluciones a la mitad y observar el crecimiento de los microorganismos para luego definir la CIM

e-test:

MÉTODO DE GRADIENTE ANTIBIÓTICO (E-TEST)

Este es un método cuantitativo. El principio de este método es una expansión de la técnica de difusión en disco. En el método E-test podemos, mediante lectura directa, determinar la CIM.

Consiste en una tira de plástico no poroso de 6 cm de largo por 5 mm de ancho que incorpora un gradiente predefinido de antimicrobiano equivalente a 15 diluciones. El protocolo para preparar el inóculo es el mismo que para la difusión en disco. Siguiendo el método de difusión, una vez inoculado la placa de agar con el microorganismo, se coloca la tira de E-test sobre su superficie, produciéndose de forma inmediata una difusión del antibiótico desde el soporte

hasta el agar, creándose de este modo a lo largo de la tira un gradiente exponencial de las

concentraciones del antimicrobiano. Tras la incubación de las placas, se puede observar una

zona de inhibición elipsoidal y simétrica. Después de la incubación la CIM será el valor donde

la elipse corta la tira. Las tiras deben conservarse a menos de 20°C y deben estar protegidas

de la humedad. Antes de usarse se deben atemperar a temperatura ambiente durante por

lo menos 30 minutos. Las placas de Petri con el medio de MH y la forma de sembrado es la

misma que en el método de disco difusión. Luego se colocan las tiras sobre la superficie del

agar. Se debe dejar absorber el inóculo de 10 a 15 min para asegurar que la superficie del agar

esté completamente seca antes de aplicar las tiras. Debemos asegurarnos que la tira contacte

completamente con la superficie del agar. No se deben mover las tiras una vez que han sido

colocadas, ya que el antibiótico empieza a difundir rápidamente. Cuando se usa una placa

de Petri de 100 mm depositar solo una tira por placa y poner la tira en el centro de la placa,

si se usa una de 150 mm no se deben colocar más de 6 tiras. Se incuba durante 16 a 20 hs

a 37°C o según los requerimientos óptimos de la cepa

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