PRÁCTICA ENZIMAS

Universidad de Oriente

Núcleo Sucre

Escuela de Ciencias

Laboratorio de Biología II

PRÁCTICA Nº 4

ENZIMAS (ESTUDIO DEL EFECTO DE LAS VARIACIONES DE PH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA)

BACHILLERES:

Luis Duran C.I 19.537.449

Eliannys Pérez C.I 22.971.947

Sección: 02

Cumaná, Marzo de 2014

INTRODUCCIÓN.

La célula es la unidad anatómica, fisiológica y reproductiva de todo ser vivo. En una célula se encuentran distintos compuestos químicos, que constituyen la parte viva de la célula, llamada antiguamente protoplasma, cada uno de ellos conserva sus propias características (Paulson J, Sasisekharan R. 2005).

Cada célula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que comporta continuos cambios en su estado bioquímico, en la base de la cual están las enzimas (proteínas que se encuentran en la célula y son las encargadas de producir las reacciones químicas de la misma, tienen el poder de catalizar, facilitar, y agilizar determinados procesos sintéticos y analíticos). Presentando una series de características muy importan, poseen un efecto catalizador al reducir la barrera energética de ciertas reacciones químicas,Actúan en pequeñas cantidades también influyen sólo en la velocidad de reacción sin alterar el estado de equilibrio, además forman un complejo reversible con el sustrato.

Las enzimas presentan una amplia variedad de funciones como biocatalizadores, es decir, aceleran las reacciones químicas en los seres vivos sin modificarse. Al acelerarse las reacciones, disminuye la energía de activación y tiempo de reacción. Enzimas tales como las amilasas y las proteasas son capaces de degradar moléculas grandes (almidón o proteínas, respectivamente) en otras más pequeñas, de forma que puedan ser absorbidas en el intestino.Estas son indispensables en la transducción de señales y en procesos de regulación, normalmente por medio de quinasas y fosfatasas. También son capaces de producir movimiento, como es el caso de la miosina al hidrolizar ATP para generar la contracción muscular o el movimiento de vesículas por medio del citoesqueleto(Grisham, Charles M. 1999).

A las enzimas se les puede clasificar en:

Óxido-reductasas: estas enzimas están vinculadas con las reducciones y oxidaciones biológicas que intervienen en los procesos de fermentación y de respiración.

Transferasas: estas enzimas son las encargadas de catalizar la transferencia de una porción de molécula a otra. Además, estas enzimas son las que actúan sobre distintos sustratos, transfiriendo glucósido, sulfató, amina, aldehído, entre otros grupos.

Hidrolasas: estas enzimas actúan sobre las moléculas de protoplasma, tales como las de grasas, de glicógeno y de proteínas. El acto de catalizar es realizado en la escisión de los enlaces de los átomos de nitrógeno y carbono o bien, de carbono y oxígeno.

Isomerasas: estas son las que actúan sobre ciertas sustancias a las que transforman en otras isómeras, lo que significa que tienen la misma fórmula empírica pero un desarrollo diferente.

Liasas: estas enzimas son las que actúan sobre los enlaces entre los átomos de carbono, carbono y oxígeno, carbono y azufre o carbono y nitrógeno, escindiéndolos.

Ligasas: estas enzimas en cambio, son las que permiten que dos moléculas se unan, Esto se da al mismo tiempo en que el ATP se degrada y libera energías que son las necesarias para que dichas moléculas puedan unirse.

OBJETIVOS

Objetivo general.

Estudiar las enzimas

Objetivos específicos.

Evaluar la concentración de la enzima sobre la velocidad de la reacción.

Diseñar una curva de calibración.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Actividad Nº1 Diseño de la curva de calibración.

Se tomo seis tubos previamente rotulados y secos y se monto una batería con las cantidades de reactivos dadas en la guía.

Utilizando el filtro rojo (600nm) del colorímetro, leímos la intensidad del color obtenido en cada uno de los tubos.

Por ultimo se realizo la gráfica de los datos del espectrofotómetro en relación a la cantidad de almidón agregado.

Actividad Nº2 Efecto del tiempo de incubación de la enzima (amilasa) sobre la formación del producto.

Se obtuvo unos 15 ml de nuestra propia saliva en un beaker pequeño, luego de esto se rotulo 7 tubos de ensayos limpios y secos y después se procedió al montaje de la batería con las cantidades de reactivos señaladas en la guía de laboratorio.

Posteriormente de esto se mantuvieron los tubos de ensayos en un baño de maría a 37ºC.

A parte de esto, montamos una batería de 2 tubos A y B. en el A agregamos 1 ml de saliva y al B 1 ml de agua destilada, a ambos beaker le agregamos 0,2 % de almidón y se tomo un tiempo de 30 segundos y luego se procedió a sacar 1 ml del beaker B y lo añadimos al tubo A

Transcurridoslos 30 segundos sacamos 1 ml del beaker A y lo agregamos al tubo B y así sucesivamente distribuyendo las soluciones. Pasamos a leerlo en el espectrofotómetro y se anotaron los resultados.

Actividad Nº3 Efectos de la concentración de la enzima sobre la velocidad de la reacción.

Se rotularon seis tubos de ensayos limpios y secos y preparamos una batería con las cantidades de reactivos señaladas en la guía de laboratorio.

Posteriormente a esto se incubo unos 3 min cada tubo a 37ºC

Por ultimo se le añadió a cada tubo 1 ml de yoduro de potasio y realizamos las lecturas inmediatamente en el espectrofotómetro.

Actividad Nº4Efecto de la concentración del sustrato sobre la velocidad de reacción.

Al igual a la actividad anterior se procedió a rotular seis tubos de ensayos limpios y secos y se monto la batería con la cantidad de reactivos señalados en la guía de laboratorio.

Se incubo a 37ºC por tres minutos y añadimos a cada tubo 1 ml de yoduro de potasio y realizamos las lecturas en el fotocolorímetro y graficamos la formación del producto en función de la concentración del sustrato.

RESULTADOS

Tabla

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