Comprender La AgroIndustria

UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

FACULTAD DE CIENCIAS Y EDUCACION

PROYECTO CURRICULAR DE LICENCIATURA EN QUIMICA

BIOQUIMICA

APLICACIÓN DE LA LEY DE BEER-LAMBERT, DETERMINACION CUANTITATIVA DE PROTEINAS POR EL REACTIVO DE BIURET Y EL REACTIVO DE BRADFORD

1. Claudia Patricia López

2. Hypatia Milena Hurtado

RESUMEN

En esta práctica se utilizaran dos métodos para la cuantificación de proteínas: Biuret y Bradford. Para cada uno de los métodos se realizaron, una curva estándar y se busco el rango de sensibilidad. Se realizaron cinco diluciones, a las cuales se les realizo la cuantificación aparte de otras dos muestras problemas de baja y alta concentración, respectivamente, discutiéndose y comparándose los resultados obtenidos, determinando cuantitativamente las proteínas.

Palabras clave: cuantificación de proteínas, Biuret, Bradford.

OBJETIVOS

• Construir curvas de calibración de patrones de proteína conocidos.

• Determinar colorimétricamente la concentración de una solución problema mediante el método de biuret y bradford.

MARCO TEORICO

Las proteínas son materiales que desempeñan un mayor numero de funciones en las células de todos los seres vivos. Por un lado forman parte de la estructura básica de los tejidos (musculos, tendones, piel, uñas, etc.) y, por otro, desempeñan funciones metabolicas y reguladoras (asimilación de nutrientes, transporte de oxigeno y de grasas en la sangre inactivación de materiales toxicos o peligrosos, etc.). también son los elementos que definen la identidad de cada ser vivo, ya que son la base de la estructura del código genético (ADN) y de los sistemas de reconocimiento de organismos extraños en el sistema inmunitario.

Las proteínas son moléculas de gran tamaño formadas por largas cadenas lineales de sus elementos constitutivos propios: los aminoácidos.

Las proteínas son macromoléculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos. El nombre proteína proviene de la palabra griega πρώτα ("prota"), que significa "lo primero" o del dios Proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar.

Las proteínas desempeñan un papel fundamental en los seres vivos y son las biomoléculas más versátiles y más diversas. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:

• estructural (colágeno y queratina),

• reguladora (insulina y hormona del crecimiento),

• transportadora (hemoglobina),

• defensiva (anticuerpos),

• enzimática,

• contráctil (actina y miosina).

Las proteínas de todo ser vivo están determinadas mayoritariamente por su genética (con excepción de algunos péptidos antimicrobianos de síntesis no ribosomal), es decir, la información genética determina en gran medida qué proteínas tiene una célula, un tejido y un organismo.

Ley de Lambert-Beer

La fracción de luz incidente absorbida por una solución a una longitud de onda determinada es proporcional al espesor de la capa absorbente (paso óptico) y a la concentración de sustancia absorbente. Estos dos parámetros están combinados en la ley de Lambert-Beer:

log Io/I = εcl

Io: intensidad de la luz incidente.

I: intensidad de la luz transmitida.

ε: coeficiente de absorción molar (en unidades de litros/mol x cm).

c: concentración de la sustancia absorbente (en moles/l).

l: paso óptico de la muestra que absorbe luz (en cm).

La expresión log Io/I se denomina absorbancia y se designa por A. Es una medida de la cantidad de luz absorbida por la solución. El porcentaje de transmitancia (%T = I/Io x 100) es una medida la cantidad de luz que atraviesa la solución.

La ley de Lambert-Beer se cumple si la luz incidente es paralela y monocromática y si las moléculas de soluto y disolvente están orientadas al azar. Con una capa absorbente de paso óptico fijo la absorbancia es directamente proporcional a la concentración del soluto absorbente.

El coeficiente de absorción molar es una constante física que representa la absorbancia de una sustancia cuando el espesor de la capa absorbente es 1 cm y la concentración de la sustancia absorbente es 1 mol/l. El coeficiente de absorción molar varía con la naturaleza del compuesto absorbente, el disolvente y la longitud de onda de la radiación.

Albúmina

Constituye más de la mitad de todas las proteínas séricas y gran parte de la presión oncótica depende de ella. Transporta sustancias menos solubles como ácidos grasos, bilirrubina, hormonas, calcio, metales, fármacos y vitaminas. Su concentración de de 3,4- 5,0 g/dL.

Sufre una reducción en procesos como afecciones hepáticas, glomerulonefritis o nefrosis, afectaciones gastrointestinales e inanición. También existe analbuminemia hereditaria, aunque se trata de un proceso poco común. Por su parte, su aumento puede ser indicativo de deshidratación.

Las proteínas se sintetizan dependiendo de cómo se encuentren regulados los genes que las codifican. Por lo tanto, son suceptibles a señales o factores externos. El conjunto de las proteínas expresadas en una circunstancia determinada es denominado proteoma.

Existen diversos métodos que permiten cuantificar la concentración de proteína presente en las muestras biológicas, basados en las propiedades que muestran las proteínas en solución. Los métodos más usuales son:

• Método de Kjeldahl

• Reacción del Biuret.

• Método de Lowry.

• Método de Bradford.

• Método del ácido Bicincónico.

KJELDAHL

Es un método muy utilizado para la determinación de nitrógeno orgánico descubierto a fina les del siglo XIX por el químico sueco danés Kjeldahl.

El método consiste en realizar una digestión de la muestra con H2SO4 (ácido sulfúrico) a una temperatura de alrededor de 338ºC (que corresponde al punto de ebullición del acido). De esta forma la muestra se carboniza pasando todo el C a CO2 y todo el N a (NH4)2SO4.

Tras hacer esto añadimos NaOH (hidróxido sódico) formándose así NH3 (amoníaco) a partir del NH4+ (estando ya todo el nitrógeno de la muestra en forma de NH3). Destilamos la disolución recogiendo el NH3 sobre H2O y lo valoramos con HCl (ácido clorhídrico).

Según el volumen de HCl consumido obtendremos la cantidad de amoníaco que hay y de ahí el porcentaje de nitrógeno de la muestra. Está demostrado que las proteínas tienen un 16% de nitrógeno, luego bastará

...