Anatomia Patologica

CUADERNO

DE

PRÁCTICAS

1º Anatomía Patológica y Citología

PROCESADOR DE TEJIDOS

• Objetivo:

El objetivo del procesador de tejidos es rellenar los espacios de los tejidos intra y extracelulares con parafina para otorgarle consistencia para la posterior microtomía.

• Componentes del procesador:

El procesador está compuesto por diez recipientes de cristal y dos de metal con resistencias. Los recipientes de cristal se reparten de la siguiente forma: 2 para etanol de 80º, 2 para etanol de 96º, 3 para etanol de 100º o absoluto y 3 para xilol. En los de metal se introduce parafina que se deshace por acción del calor y penetra en los tejidos dándoles una cierta consistencia. Además, las muestras van introducidas en un cestillo metálico que se va moviendo automáticamente.

• Procedimiento técnico:

Para comenzar la inclusión hay que programar el procesador, lo cual se hace de la siguiente forma: a los dos primeros recipientes se les da un tiempo de dos horas, a los ocho siguientes un tiempo de una hora y media, y a los dos de parafina que son los últimos se les da un tiempo de dos horas.

Hecho esto se procede a introducir el cestillo con las muestras en el primer recipiente y cuando termina en este se pasa automáticamente al segundo y así sucesivamente hasta terminar el programa. El programa dado puede ser modificado dependiendo del laboratorio donde se trabaje.

Una vez sacadas las muestras del procesador de tejidos se ponen en la estación de parafina para recubrirlas por fuera con este material.

ESTACIÓN DE PARAFINA

• Objetivo:

El objetivo es lograr un bloque consistente en el que esté incluido el tejido procesado previamente para poder obtener cortes finos (de 4 a 6 micras de grosor) con el micrótomo.

• Componentes de la estación:

Está compuesta de un dispensador de parafina, un recipiente con parafina líquida para depositar las muestras que no se van a recubrir con parafina por el momento, una placa fría para que se endurezcan los bloques ya recubiertos y un apartado para los recipientes de metal en los que se ponen los tejidos.

• Procedimiento técnico:

Se coge un cassette del recipiente con parafina líquida, se abre, se pone el tejido en un recipiente de metal (que están calientes) y encima se coloca la parte de abajo del cassette. Se le hecha parafina por encima (apretando en la palanca con unas pinzas para que salga la parafina del dispensador), se deja enfriar unos segundos y se le vuelve a echar parafina. Se pone en la placa fría para endurecer el bloque de parafina. Una vez enfriado se guarda en el refrigerador hasta el momento de realizar los cortes con el micrótomo.

MICROTOMO

• Objetivo:

El objetivo del micrótomo es conseguir cortes lo suficientemente finos (de 4 a 6 ) del tejido incluido (en parafina) para su posterior visualización con el microscopio óptico.

• Componentes y material necesario:

El micrótomo se compone de: un porta bloques con orientación regulable que avanza sobre una cuchilla discontinuamente, un porta cuchillas con un sistema para regular la inclinación de la cuchilla, una palanca que actúa de tornillo macrométrico que acerca o aleja el porta bloques a la cuchilla, un tornillo micrométrico que mueve el porta bloques de arriba abajo haciéndolo incidir sobre la cuchilla y un tornillo en donde pone el grosor de los cortes.

El material necesario para realizar la microtomía además del micrótomo es: una cuchilla para micrótomo, un baño con agua relativamente caliente para estirar los cortes ya que se pliegan, una aguja histológica para recoger los cortes realizados y ponerlos en el baño para que se estiren, una bolsa de basura para tirar lo desbastado y los cortes inservibles, un cepillo para limpiar el micrótomo, portaobjetos para recoger los cortes elegidos del baño y un lápiz de grafito para numerar los portas.

• Procedimiento técnico:

Se procede a colocar todo el material necesario en la mesa del micrótomo para no perder tiempo, se coge un bloque de parafina del refrigerador y se eliminan los restos de parafina de su periferia, se coloca en el porta bloques, se orienta el porta bloques y la cuchilla, se pone un grosor de 20 para desbastar hasta conseguir un corte uniforme en el que aparezca toda la superficie del tejido, se cambia el grosor a 4 o 6 para obtener cortes finos que se recogen con la aguja histológica y se depositan en el baño. Una vez estirados se recogen los cortes, seriados o no, con portas numerados para su secado en la estufa.

Se limpia el micrótomo y se recoge todo el material. El bloque se vuelve a guardar en el refrigerador.

SECADO

• Objetivo:

El objetivo es eliminar el agua de los tejidos por evaporación así como la parafina sobrante que se pega al porta al derretirse y así se evita el desprendimiento de los cortes.

• Material necesario:

Lo único que se necesita es una estufa de laboratorio.

• Procedimiento técnico:

Colocar en la estufa los cortes antes realizados con el micrótomo a 37ºC durante toda la noche o a 60ºC durante 1-2 horas.

TINCIÓN DE HEMATOXILINA-EOSINA

• Objetivo:

El objetivo perseguido es teñir los tejidos previamente secados en la estufa par poder diferenciar unas estructuras de otras en la posterior visualización con el microscopio óptico.

• Material necesario:

Se necesita una cubeta para la hematoxilina (Harris o Mayer), dos cubetas para la eosina (alcohólica o acuosa), un cestillo con los portas, tres cubetas para el xilol del desparafinado, cuatro más para el alcohol (100º, 96º, 70º) y agua destilada del rehidratado, tres cubetas para alcohol (70º, 96º, 100º) de la deshidratación y otras tres para el xilol del aclarado, alcohol ácido al 1%, agente de azuleamiento, Eukitt, cubres y aguja histológica para darle golpes a los cubres. Además, se necesita una campana y guantes azules por el uso de xilol durante la tinción.

• Procedimiento técnico:

Se empieza por desparafinar la muestra introduciendo el cestillo en las tres cubetas con xilol durante 1 minuto en cada una. Se rehidrata la muestra introduciendo el cestillo en las cubetas con alcohol de 100º (2 cambios de un minuto), 96º (1 cambio de un minuto), 70º (1 cambio de un minuto). Ahora se introduce el cestillo en la cubeta con hematoxilina (Harris 2 minutos o Mayer 15 minutos), seguidamente se elimina el exceso de tinción con alcohol ácido al 1% si es hematoxilina de Harris y con un agente de azuleamiento (agua corriente, CO3Li). Se introduce el cestillo en la cubeta con eosina (alcohólica o acuosa) durante un minuto y se elimina el exceso con agua corriente si es

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