Cepas FAO

8. NORMAS

Los estándares de referencia primarios son materiales homogéneos con propiedades tales como identidad, pureza y potencia que han sido medidas y certificadas por el Instituto Nacional de Estándares y Tecnología, la Convención de la Farmacopea de EE. UU., la Sociedad Estadounidense de Pruebas y Materiales u otra organización equivalente. Los químicos usan estos estándares para preparar estándares de trabajo para análisis químicos y de drogas.

Aunque la microbiología es una ciencia relativamente menos exigente que la química, en el laboratorio de microbiología de alimentos se utilizan patrones de referencia. Los microbiólogos utilizan cultivos de referencia para determinar cualitativamente que los medios funcionan correctamente.

Con mucho, la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) es la mayor fuente de estos cultivos. Difco Laboratories y BBL Microbiology Systems son esencialmente distribuidores que obtienen sus cultivos principalmente de ATCC. Los cultivos normalmente se liofilizan o se liofilizan, y cada cepa de cultivo ATCC tiene su propia identificación o número de código de referencia. Los cultivos se liofilizan comúnmente en ampollas de vidrio y se almacenan en refrigeración (4-8°) antes de su uso.

Además de los polvos liofilizados, los distribuidores comerciales pueden suministrar cultivos ATCC impregnados en discos de filtro. Tanto los cultivos liofilizados ATCC como los cultivos en disco ATCC cuentan con una fecha de caducidad más allá de la cual no deben utilizarse. Al ordenar estos cultivos, el analista debe rotar las existencias. Además, se debe realizar un inventario de estos cultivos de referencia disponibles comercialmente cada 3 meses. Los cultivos que hayan pasado su fecha de caducidad deben esterilizarse en autoclave y desecharse.

8.2 Preparación y uso

Los cultivos liofilizados se rehidratan rompiendo asépticamente el cuello de la ampolla, agregando el polvo a un medio no selectivo apropiado para el crecimiento del organismo e incubando el cultivo rehidratado en las condiciones recomendadas para ese organismo. Un asa llena del cultivo se vierte en un agar para obtener colonias aisladas. La placa se incuba en las condiciones prescritas. El analista entonces procede como desea con las colonias aisladas.

Para rehidratar cultivos de disco, se utilizan fórceps estériles para extraer asépticamente un disco del vial y colocarlo en un tubo que contiene infusión de cerebro y corazón o caldo de soja Trypticase. El caldo se agita hasta que el disco se disuelve por completo. Una asa llena del cultivo disuelto se vierte en un agar apropiado para obtener colonias aisladas y la placa se incuba en las condiciones prescritas por el método. El analista entonces procede como desea con las colonias aisladas.

8.3 Período de validez y condiciones de almacenamiento

Después de rehidratar los cultivos liofilizados o en disco, el analista debe mantener estos cultivos madre. Las condiciones de mantenimiento varían según el microorganismo; Los procedimientos de mantenimiento para aquellos organismos de mayor interés para el microbiólogo de alimentos se dan en el Anexo 12.

Para

El analista también debe mantener un registro que contenga la siguiente información: nombre del cultivo (género y especie), designación de la cepa, fuente del cultivo (tanto comercial como original, por ejemplo, tipo de alimento o muestra clínica de la que se aisló originalmente el cultivo), fecha de recepción, fecha de rehidratación, todas las fechas de subcultivo en serie del cultivo madre rehidratado, todos los medios utilizados (crecimiento, purificación y almacenamiento), período de incubación y temperatura utilizada para el crecimiento y la purificación, temperatura utilizada para el almacenamiento, ubicación del cultivo, e iniciales del analista que realiza cualquier segmento particular del procedimiento de mantenimiento.

8.4 Especificaciones de rendimiento

Los cultivos bacterianos de referencia deben cumplir con los criterios de pureza, morfología, reacciones bioquímicas y reacciones serológicas.

Pureza

La pureza de los cultivos microbiológicos se determina sembrando un caldo de cultivo en un agar en placas selectivo, no selectivo y/o diferencial adecuado. El agar selectivo contiene uno o más ingredientes para inhibir el crecimiento de organismos no analitos o competidores; el agar no selectivo no. El agar diferencial simplemente indica cierta información bioquímica sobre el cultivo inoculado por un cambio de color en el agar. Para asegurar la pureza de un organismo, es preferible utilizar agar tanto selectivo como diferencial. Si no se dispone de un agar diferencial para un organismo en particular, se puede sustituir por un agar no selectivo.

La aparición de más de un tipo morfológico de colonia indica que el cultivo puede estar contaminado. Sin embargo, los diferentes tipos morfológicos pueden deberse a mutantes, organismos estresados ​​o dañados o medios defectuosos. En este caso, se deben purificar una o más colonias de morfología típica. Hay dos enfoques:

En el primer enfoque, las colonias seleccionadas se inoculan en un caldo apropiado, se incuban en las condiciones prescritas y se vuelven a sembrar en placas de agar. La ventaja de usar un caldo, especialmente uno no selectivo, es que le da al organismo la oportunidad de resucitar o revivir y alcanzar una alta densidad de población. Sin embargo, una desventaja es que puede dar a los organismos competidores la oportunidad de crecer demasiado en el analito objetivo. En cualquier caso, si todas las colonias del agar de siembra son morfológicamente similares, se puede suponer razonablemente que el cultivo ha sido purificado.

En el segundo enfoque, las colonias seleccionadas se vuelven a sembrar directamente en agares de placa apropiados. La ventaja de volver a sembrar los medios de siembra directamente, en lugar de inocular un caldo y luego volver a sembrar los medios de siembra, es el ahorro de tiempo. Sin embargo, a veces es más difícil obtener colonias aisladas con este segundo enfoque. Además, puede ser muy estresante para los organismos recogidos de una placa de agar selectivo pasarlos directamente a otra placa de agar selectivo sin ninguna reanimación. En cualquier caso, si todas las colonias del agar de siembra son morfológicamente similares, se puede suponer razonablemente que el cultivo ha sido purificado.

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