Determinacon de acido galaracturonico mediante metodo m-hidroxidifenil en pectinas obtenidas por ultrasonido de alta intensidad

GRUPO: BIO-9U-VES

                                                PERIODO CUATRIMESTRAL: 16 / 02

Introducción

En el siguiente trabajo se replicó la metodología de M-hidroxidifenil para la determinación de ácido galacturónico  presente en pectinas de tuna obtenidas por distintos tesistas de la UAEH, con la finalidad de dar una caracterización físico química a las pectinas para conocer sus características en este caso el porcentaje de ácido galacturónico que presentan dichas muestras de pectina para su posterior manejo y aplicación a algún proceso alimentario.

Objetivos de la práctica:

• Determinar el porcentaje de ácido galacturónico contenido en las pectinas de tuna

 Materiales y métodos

Preparación de los reactivos

Los reactivos utilizados para esta técnica fueron la solución problema de pectina de tuna, la solución de ácido sulfamico y tetraborato de sodio, además de la utilización de meta-hidroxidifenil para la reacción colorimétrica.

Para preparar el meta-hidroxidifenil se tomaron 0.5g de NaOH y se agregó agua destilada hasta que alcanzara el peso de 100gr la solución preparada, posterior a esta solución se enfrió y se agregaron 0.15g de meta-hidroxidifenil a la solución de NaOH. Por su parte para la preparación de del tetraborato de sodio fueron utilizados 75mM de sodio los cuales fueron disueltos en 250ml ácido sulfúrico, en el caso del ácido sulfamico se utilizó reactivo que ya se encontraba preparado.      

Para la preparación de las muestras se pesaron 30mg de la pectina problema y se aforaron a 100ml con agua destilada los cual teóricamente tendría una concentración de 100mg/l de ácido galacturónico.

Preparación de la técnica de determinación de AGA

Posterior a la preparación de los reactivos el siguiente paso es la aplicación de la técnica en la cual se tomaron alícuotas de 400µL de la solución en un tubo de ensaye, después de pusieron 40µL de Ácido sulfamico y por último se utilizaron 2.4mL de tetraborato de sodio, posterior a la preparación las muestras fueron agitadas en un vortex durante 4s, después del agitación los tubos fueron puestos en un baño de agua con hielo durante 1:30 min siendo retirados del baño frio después del tiempo, esta metodología se repitió para cada muestra, el total de muestras a preparar fue de 5 muestras problema de pectina, una de pectina comercial y un control, las muestras de pectinas fueron utilizadas 4 repeticiones y en el caso del blanco solo dos repeticiones.

[pic 4]
Ilustración 1 Preparación de las muestras de pectina

Una vez que estaban todas las muestras de pectina preparadas fueron introducidas en un baño de agua caliente por 20 min, posteriormente a este paso son introducidas nuevamente en el baño frio, finalmente se tomaron los valores espectrofotométricos  a una longitud de onda de 525nm de las muestras y posterior a esto se realizaron los cálculos pertinentes para la determinación teórica del % de AGA presente en las muestras de pectina.

[pic 5]
Ilustración 2 Muestras de pectina con m-hidroxidifenil

Resultados  

Los resultados de la medición de ácido galacturónico (AGA) de las pectinas por vía espectrofotométrica fueron tomados en su punto más alto y a los 4 minutos después de agregar el meta-hidroxidifenil, de acuerdo a esto los valores obtenidos de las pectinas fueron los siguientes.

Tabla 1 valores de espectrofotometría de las pectinas analizadas (Máximo y 4 minutos)

Nota: los Resultados de las de cada muestra de pectina que no aparecieron fueron muestras contaminadas con agua en baño de temperatura, debido a esto no ocurrió ninguna reacción en ellos y fueron omitidos del reporte.

Seguido de esto mediante la interpolación con graficas estándar de AGA realizadas en el software sigma plot fueron obtenidos los porcentajes teóricos de AGA presente en las pectinas   los resultados fueron. [pic 6]Ilustración 3 Grafica estándar de AGA máximo

[pic 7]Ilustración 4 Grafica estándar de AGA a los 4 mi

Tabla 2 Valores teóricos del % de AGA presente en las pectinas

Como se observa en los resultados en su mayoría las pectinas analizadas se encuentran por arriba del 60% de AGA siendo la excepción la pectina PS 9010 la cual en ninguna de las dos mediciones alcanzó el porcentaje esperado lo cual amerita la repetición de esa muestra con la finalidad de obtener el porcentaje esperado de esa pectina controlando las variables necesarias para evitar su contaminación o que algún factor intervenga en la obtención de resultados concisos, siendo únicamente esta pectina la cual se repetirá para esta técnica debido a que el resto de las pectinas presentaron un comportamiento a las pectinas utilizadas en la industria alimentaria como aditivos de alimentos las cuales presentan una concentración de 60 a 99 % de AGA.

Conclusiones

De la siguiente metodología se concluye que la técnica de m-hidroxidifenil para la determinación de ácido galacturónico en pectinas es técnica ideal para comenzar la caracterización físico química de pectinas obtenidas en laboratorio la cual permite conocer mediante una manera teórica y preliminar el rendimiento de las pectinas determinado la concentración de AGA que contienen, para después ser sometidas a una caracterización físico-química más avanzada y reologicas para su posterior inclusión dentro de los mercados de la industria alimentaria, además de que la metodología empleado mostro muy buenas resultados en la determinación de el AGA lo cual da pauta para continuar con el resto de las pruebas a realizar en la pectinas durante el resto del verano científico.

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