METODO URICASA- POD PARA DETERMINACION IN VITRO DEL ACIDO URICO

METODO URICASA- POD PARA DETERMINACION IN VITRO DEL ACIDO URICO

1. INTRODUCCION

Los nuevos métodos analíticos se desarrollan con el fin de mejorar la exactitud y la precisión de los métodos existentes, también tiene el propósito de permitir el manejo de equipo automatizado, para reducir los costos de los reactivos o de la mano de obra, o para medir un compuesto nuevo. En cualquier caso, se debe verificar experimentalmente el rendimiento analítico en el laboratorio clínico mismo, aun si se cree que el método nuevo es una mejora con respecto a los métodos anteriores. La extensión de los experimentos y la interpretación de los datos van a depender del propósito de la evaluación y de quien la realiza, pero el fundamento básico y el diseño experimental son similares en todas las evaluaciones. El proceso de evaluar un método es distinto del proceso rutinario para el control de calidad, después de haber sido introducido en la rutina diaria. El control de calidad rutinario (diario) es un proceso establecido por medio del cual se detectan los incrementos en los errores analíticos de un método con el fin de evitar la liberación de datos incorrectos de los pacientes. El control de calidad rutinario detecta los errores sólo cuando estos son superiores a los errores presentes registrados en el momento que se establecieron los intervalos para los controles. El uso del control de calidad rutinario no le permite al investigador determinar la magnitud de los errores inherentes del método o de decidir si son aceptables.

1. OBJETIVOS

• Proporcionar resultados de análisis con exactitud y con precisión, de tal manera que se puedan obtener conclusiones y tomar decisiones basadas en una información que tenga niveles aceptables de error.
• Manejar e interpretar adecuadamente las cartas control.

1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoína y peróxido de hidrógeno que en presencia de POD y 4-AF y DCPS forma un compuesto rosáceo.

                                            Uricasa

ác. Úrico + 2H20 + 02                               Alantoína + CO2 + 2H202 [pic 2]

                                             POD

2H202 + 4AF + DCPS                              Quinona + 4H20 [pic 3]

4-AF = 4 aminofenazona

DCPS = 2, 4, diclorofenol sulfonato

Guardar en refrigeración a 2-8 ºC. Estos productos son, solamente, para uso de laboratorio y pruebas "in vitro".

1. PREPARACION DE LA MUESTRA

MUESTRA

• Suero, plasma u orina.
• Orina: Diluir la orina al 1:10 con agua destilada, mezclar y seguir la técnica.
• Multiplicar el resultado por 10.

1. REACTIVOS Y MATERIAL

• 1Micropipeta de 1 mL
• 1Micropipeta de 50 µL.
• 1Piseta con agua desionizada o destilada
• 2Celdas de plástico de 3 ml
• Tubos de vidrio de 13X100
• Puntas para micropipeta. Gradilla.
• Espectrofotómetro

[pic 4][pic 5][pic 6]

[pic 7]

[pic 8][pic 9]

1. PROCEDIMIENTO

• Extraer la muestra de sangre y llevar a baño maría por espacio de 10 minutos a 37°C

[pic 10][pic 11]

• Una ver cumplido los 10 minutos pasamos la muestra problema la centrifuga por espacio de 5 minutos, para separar el plasma de la sangre.

[pic 12][pic 13]

[pic 14]

• hacemos los cálculos y mezclamos el reactivo e incubar por 10 minutos a 37°C

• Trascurrido el tiempo hacemos la lectura a 505nm

[pic 15][pic 16][pic 17]

RESULTADOS:

             FORMULA

[pic 18]

[AU] mg/dL = Abs MP X [ST]                    

                        Abs ST                                

ABSORVANCIAS:

• Standard: 0.790
• Muestra problema: 1.484

[AU] mg/dL = 1.484 x 10 = 18.78 mg/dL

                          0.790

1. CONCLUSIONES

En esta práctica se logró hacer la determinación de urea (la cual es el resultado final del metabolismo de las  proteínas) en suero (debido a que si se utiliza la sangre entera, es decir plasma + suero, en estos hay una gran diferencia de valores que existe entre el suero y los eritrocitos, por lo que se prefiere el suero o en su defecto el plasma para esta determinación) mediante una reacción colorimétrica en donde la urea presente en las muestras reaccionó con él o-ftalaldehido en medio ácido (solución de boratos, que son sales o ésteres de ácido bórico) originando así un complejo coloreado (rosa) que se cuantificó espectrofotométricamente dando así como producto a la isoindolina, la cual le proporcionó la coloración a la muestra y de esta manera la intensidad del color formado por la reacción fue proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada. De esta manera al realizar la lectura en el espectrofotómetro logramos obtener las absorbancias en el espectro de luz visible en verde (que va de 500 –560nm y nuestra lectura fue en 505nm)

...