MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

Existen 2 métodos de diagnóstico microbiológico: los directos y el indirecto.

Los métodos directos tienen como objetivo primordial identificar al microorganismo específico que está causando el daño o la patología, mientras que los métodos indirectos buscan la manifestación de una patología basado en la respuesta del sistema inmune, con la búsqueda de antígenos o anticuerpos.

Según su clasificación podemos encontrar:

A. Métodos Directos:

I Tradicionales.

- Observación microscópica.

- Cultivo.

- Identificación.

II Moleculares.

- Hibridación

- P.C.R.

III Detección de antígenos:

- Inmunofluorescencia directo

- Elisa directo

B. Métodos indirectos:

- I. F.

- Elisa.

Métodos directos.

1.- Tradicionales:

A) Observación Microscópica:

Podemos distinguir dos tipos diferentes de muestras biológicas:

• Preparaciones en fresco o in vivo.

Las preparaciones al fresco son muy fáciles de preparar; se prepara una disolución acuosa donde se introduce el microorganismo, se pone una gota en un porta, se tapa con un cubre y se observa. Se emplean para observar la morfología de bacterias, especialmente de espiroquetas. Sirve también para observar la movilidad de las bacterias y para observar cambios citológicos; mitosis, esporulación, etc. También sirve para observar inclusiones (grasas, etc.)

Ejemplos

- Suero fisiológico: demostrar la presencia de Tricomonas y Treponemas.

- Solución de KOH (10%): identificación de Hongos.

- Tinta china: El frotis se hace con la nigrosina; no hay que fijarla (por eso no se considera a la tinta china como tinción). Nos sirve para observar la cápsula de bacterias, indicadora de virulencia. Esta técnica se utiliza principalmente para identificación delCryotococcus Neoformans.

• Preparaciones fijadas y teñidas.

Las preparaciones fijadas y teñidas son las más utilizadas en Microbiología por dos razones:

- La tinción facilita la visualización de la bacteria

- Con varios colorantes clasificamos la bacteria en distintos grupos.

La mayor desventaja es que la bacteria ya está muerta.

- Tinción Simple: con azul de metileno. Todas las bacterias aparecen teñidas de azul.

- Tinción de Ziehl-Neelsen: Este método se basa en que las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan bacilos ácido-alcohol resistentes o BAAR. Las mico bacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.

Preparación:

En “caliente”:

Hacer un frotis de la muestra de esputo.

Dejar el frotis sobre el puente de tinción.

Aplicar fucsina-fenicada.

Calentar con un mechero hasta la emisión de vapores (3-5 minutos).

Decolorar con alcohol-ácido.

Aplicar azul de metileno (1 minuto).

Enjuagar con agua

En "frío":

Hacer un frotis.

Dejarlo en el puente de tinción.

Aplicar fucsina-fenicada (solución con fenol y mayor concentración de fucsina).

Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.

Decolorar con alcohol acido.

Lavar con agua del grifo.

Contrastar con azul de metileno

Resultados: BAAR: rojo. Núcleos: azul.

- Tinción de Gram: Debe su nombre al Bacteriologo Danés Christian Gram que la desarrollo en 1844. Es una tinción diferencial, clasificando a las bacterias en Gram + y Gram -, de acuerdo a las propiedades de su pared celular:

Preparación:

1º Fijamos la muestra mediante calor.

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