NUTRIENTES

AISLAMIENTO, IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LISTERIA

INTRODUCCIÓN

El género Listeria está compuesto por bacterias gram positivas con bajo contenido G+C, estrechamente relacionado con los géneros Bacillus, Clostridium, Enterococcus, Streptococcus y Staphylococcus. Son bacilos aerobios o anaerobios facultativos, no esporulados, no capsulados, catalasa positiva, móviles entre 10 y 25ºC (Collins et al., 1991). Listeria ha sido aislada de diferentes sitios ambientales, como; suelo, agua, efluentes, de una gran variedad de alimentos y de heces humanas y animales. El hábitat natural de estos microorganismos es probablemente la materia orgánica vegetal en descomposición y los rumiantes domésticos contribuyen

al mantenimientos de Listeria spp. en el ambiente rural a través de un ciclo continuo de enriquecimiento oral-fecal (Fenlon, 1999). La amplia distribución de L. monocytogenes se debe a la capacidad de sobrevivir durante períodos de tiempo prolongados en diferentes medios. El género Listeria comprende seis especies: L. monocytogenes, L. ivanovii, L. seeligeri, L. innocua, L. welshimeri y L. grayi. Las dos especies potencialmente patógenas son L. monocytogenes y L. ivanovii. L. monocytogenes no fue considerado un patógeno animal hasta fines de la década del 70. A principios de los años 80 emerge como uno de los patógenos humanos de origen alimentario más importante. A partir de ese momento, la literatura sobre Listeria comenzó a incrementarse y a partir de 1983 una serie de brotes epidémicos humanos en Norteamérica y Europa establecieron claramente a la listeriosis como una grave infección alimentaria (Bille, 1990). Los alimentos más frecuentemente asociados con brotes y con alto nivel de riesgo son quesos y productos lácteos, patés y salchichas, pescados ahumados, ensaladas y en general productos industrializados, refrigerados, listos para el consumo, sin requerimientos de cocción o calentamiento previo (Farber and Peterkin, 1991). Los alimentos se pueden contaminar en cualquier eslabón de la cadena productiva, así como también en el almacenamiento en frío. En la actualidad, se estima que L. monocytogenes es la principal causa de muerte originada por bacterias de origen alimentario en USA, aproximadamente se registran 2500 casos de listeriosis humana por año, incluyendo 500 muertes (Mead et al., 2006). En rumiantes, la infección por Listeria es transmitida por consumo de silaje en mal estado, en el cual la bacteria se multiplica rápidamente, dando lugar a brotes en ganado (Fenlon, 1999). El genoma de L. monocytogenes fue secuenciado recientemente y posee un cromosoma circular de 2.944.528 pb con un promedio de G+C de 39%. Se han identificado 2853 genes, sin embargo al 35.3% no se les conoce función. En el caso de L. innocua posee un único cromosoma circular de 3.011.209 pb con un contenido promedio de G+C del 37%. Dentro del género Listeria, estas dos especies presentan alto grado de homología en la secuencia del 16S rRNA, siendo las de mayor cercanía taxonómica (Von Both et al., 1999). 1.1 Serovariedades Existen hasta el momento 13 serovariedades reconocidas de L. monocytogenes; 1/2a, 1/2b, 1/2c, 3a, 3b, 3c, 4a, 4ab, 4b, 4c, 4d, 4e y 7, clasificados en base a los antígenos somáticos (O) y flagelares (H). Sin embargo, tres de ellas (1/2a, 1/2b y 4b), han sido aisladas en más del 90% de los casos humanos y animales (Low et al., 1993). Otras serovariedades, como la 1/2c, ha sido encontrada como contaminante de alimentos (Espaze el al., 1991). Algunas de estas serovariedades son compartidas por L. innocua y L. seeligeri. L. innocua está representada sólo por tres serovariedades y es considerada una variante no patógena de L. monocytogenes. La serotipificación de L. monocytogenes es el primer método de subtificación y permite identificar rápidamente los aislamientos que necesitan ser analizados posteriormente por electroforesis en campo pulsado (PFGE). Tabla 1. Serovariedades asociadas de las diferentes especies de Listeria.

EPIDEMIOLOGÍA

Estudios realizados determinaron que L. monocytogenes es un patógeno con estructura clonal y el potencial patogénico difiere entre los diferentes grupos, así como en la especificidad por el huésped y la adaptación a diferentes nichos. Rasmussen et al. (1995) demostraron que L. monocytogenes se divide en tres linajes según la secuencia de los genes de virulencia hly, iap y el gen fla que codifica para la flagelina. Wiedmann et al., (1997) confirmaron la existencia de los tres linajes genéticamente distintos, mediante ribotipificación y PCR-RFLP del gen de virulencia. La identificación y el control de estos clones epidémicos son importantes para entender la transmisión a largo plazo de L. monocytogenes y establecer sistemas eficientes de vigilancia para este patógeno. L. monocytogenes no solamente ha sido un importante modelo para la investigación inmunológica sino que también ha servido para el análisis de los mecanismos moleculares del parasitismo intracelular. Alimento Coles Leche Queso Paté Lengua de cerdo Paté de cerdo Queso blando Carne feteada Manteca Lengua de cerdo Pavo feteado Queso Pollo y pavo Queso.

PATOFISIOLOGÍA

la Infección por Listeria monocytogenes Existen dos formas de presentación clínica de la infección: a) listeriosis perinatal b) listeriosis en el paciente adulto. Las formas clínicas predominantes corresponden en ambos casos a la infección diseminada o a la infección localizada en el sistema nervioso central. Es la infección de origen alimentario con mayor tasa de mortalidad en humanos (20 al 30 % o mayor) a pesar del inicio del tratamiento antibiótico previo (McLauchlin, 1990). La infección generalmente comienza alrededor de las 20 horas después de la ingestión del alimento contaminado en los casos de gastroenteritis (Dalton et al., 1997), mientras que el período de incubación para la forma invasiva es generalmente más larga, alrededor de 20 a 30 días.(Lindan et al.,1988). Los mismos períodos de

incubación han sido descritos para animales, tanto para la gastroenteritis como para la forma diseminada. Los casos esporádicos tienen una tasa de incidencia muy baja, 2 a 8 casos anuales por millón de población en Europa y USA (Farber and Peterkin, 1991). Por este motivo, L. monocytogenes parece tener un potencial patógeno más bajo que otros microorganismos de transmisión alimentaria, lo cual está de acuerdo con la dosis letal 50 (DL50), relativamente alta. El valor determinado para el ratón infectado experimentalmente por vía oral es de 109 y por vía parenteral es de 105 a 106. La dosis mínima requerida para la infección humana no ha sido determinada, pero el número de bacterias detectadas en alimentos responsables de casos esporádicos y epidémicos de listeriosis sugiere que es alto. Esta dosis también depende de otros factores como el estado

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