Tinción de Gram. FORMATO PARA INFORME DE LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR

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UNIVERSIDAD DE LAS AMERICAS

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGÍA

FORMATO PARA INFORME DE LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR

TEMA DE LA PRÁCTICA: Tinción de Gram

1.  NÚMERO DE LA PRACTICA: 2

1. INTRODUCCIÓN

En la actualidad la tinción de gram, es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas, es muy utilizada en especial en los laboratorios microbiología clínica resulta de gran utilidad, ya que a partir de muestras clínicas directas provenientes de sitios estériles se puede saber de manera rápida las características de la muestra y hacer una diferencia de los potenciales microorganismos causantes de una infección. (Luis Esaú López-Jácome, 2014)

Se conoce como bacterias “gram positivas son heterótrofas, tienen gran variabilidad morfológica, algunas carecen de pared celular, muchas son patógenos de plantas, animales y de los seres humanos.” (Martin). Por otro lado las bacterias gram-negativas tienen una pared mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano  y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. (Santambrosio, 2009)
Muchas especies de bacterias “gram negativas causan enfermedades. Los cocos Gram-negativos causan la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae), meningitis (Neisseria meningitidis) y síntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros,” se distinguen por teñirse de color rosado. (Wikispaces, 2011)

OBJETIVOS GENERAL

• Aplicar el método de tinción de gram para la observación de los diferentes tipos de bacterias.

1. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Distinguir las células Gram Positivas de las Gram Negativas.
• Establecer las características principales que obtienen las células positivas y negativas.
• Aprender a utilizar de manera correcta los reactivos.

1. MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales

• Pipeta Pasteur
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Pinza de madera
• Mechero
• Cepas bacterianas de Estafilococos
• Cepas bacterianas de Escherichia Coli
• Asa de metal
• Papel seda

Equipos

• Microscopio OLYMPUS CX22

Reactivos

• Agua destilada
• Cristal Violeta
• Lugol
• Alcohol Acetona
• Safranina
• Aceite de inmersión

• Métodos

1. Observación de bacterias Escherichia Coli

• Se puso una gota de agua destilada sobre el portaobjetos.
• Se esterilizó la pinza que se utilizó para recoger una cepa.
• Se retiró una colonia con la pinza y se realizó un frotis bacteriano sobre el portaobjetos.
• Se sostuvo el portaobjetos con la pinza de madera y se pasó cuidadosamente la muestra por el mechero.
• Se aplicó cristal violeta hasta que la muestra quedó completamente cubierta. Se dejó secar por 1 minuto.
• Se retiró el exceso de cristal violeta y se procedió a cubrir la muestra con Lugol, hasta que quedó completamente cubierto. Se esperó 1 minuto.
• Se limpió el sobrante de Lugol y, a continuación, se puso alcohol acetona a la muestra de la misma manera que los anteriores reactivos. Esta vez, se esperó por medio minuto.
• Se quitó el exceso de alcohol acetona y se cubrió la muestra con Safranina. Se permitió reposar por 1 minuto y se secó la muestra con papel cuidadosamente.
• Se ubicó la muestra en el microscopio y se observó en lentes 4X, 10X, 40X y 100x (se puso una gota de aceite de inmersión para este lente).

1. Observación de bacterias Estafilococo

• Se repitió el procedimiento para observación de las bacterias Escherichia Coli.

1. RESULTADOS

1. DISCUSIÓN

La tinción de gram es un proceso de tinción que consta de varios métodos para lo cual se emplea  cristal violeta, lugol, etanol, agua destilada y safranina. Como colorante primario se coloca el cristal violeta que tiene una afinidad con el péptidoglicano de la membrana bacteriana, seguidamente se coloca el lugol, lo cual impide la salida del cristal violeta, formando un complejo cristal violeta yodo para que los espacios del péptidoglicano de la membrana bacteriana sean saturados. Posteriormente, se coloca alcohol-acetona lo cual tiene la función de deshidratar la pared celular bactriana y se encarga de cerrar los porros de la misma, en el caso  de ser gram negativas destruye la membrana eterna debido a que es soluble en solventes orgánicos, en el caso de ser gram positivas no reciben ningún daño debido a la gran cantidad de péptidoglicano que se encuentra en sus membranas . (Luis Esaú López-Jácome, 2014)

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