AMPLIFICACIÓN ENZIMÁTICA DE DNA POR REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

AMPLIFICACIÓN ENZIMÁTICA DE DNA POR REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

En 1983, Kary Mullís de Cetus Corporation concibió una nueva técnica que ahora se emplea mucho para amplificar fragmentos específicos de DNA sin la necesidad de células bacterianas. Esta reacción se conoce como reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La amplificación por PCR es fácil de adaptar a los moldes de RNA si primero se les convierte en DNA complementarios, con transcriptasa inversa.

Además de emplearse para amplificar fragmentos de DNA específicos, LA RCP puede generar grandes cantidades de DNA a partir de muestras mínimas. Por ejemplo la técnica de RCP se puede usar en la investigación de crimines para producir cantidades detectables de DNA a partir de una diminuta mancha de sangre seca o a partir de un solo folículo piloso hallado en la escena del crimen.

SECUENCIACIÓN DE DNA

Para 1970 ya estaba identificada la secuencia de una larga lista de proteínas, aunque aún no se lograba progreso alguno en la identificación de la secuencia de nucleótidos en el DNA. Varias razones explicaban este estado de las cosas. A diferencia del DNA, los polipéptidos tienen longitudes definidas y manejables; se disponía de varias técnicas para dividir el polipéptido en varios sitios a fin de producir fragmentos superpuestos, y la presencia de 20 aminoácidos diferentes con propiedades muy diversas hacía que la separación y la identificación de la secuencia de los péptidos pequeños fuera una tarea simple. A mediados del decenio de 1970 se produjo una revolución en la tecnología para identificación de secuencia del DNA. Para 1977 se publicó la secuencia completa de nucleótidos de un genoma vírico completo,

En 1970 se hubiera necesitado más de un año para identificar la secuencia de un fragmento de DNA de unas cuantas docenas de nucleótidos de largo; 15 años más tarde, la misma tarea podía hacerse en un solo día. No es sorprendente que con estos avances tecnológicos haya llegado una avalancha de datos de secuencias, incluidas secuencias genómicas completas de ser humano, perro (una bóxer hembra), gato doméstico, pollo, ratón, rata, varios insectos, hongos y muchas bacterias.

Estos avances en la secuenciación de DNA fueron posibles gracias a desarrollos en varias áreas. La clave inicial fue el desarrollo de métodos para determinar la secuencia de fragmentos de DNA. Este avance en sí fue posible por el descubrimiento de enzimas de restricción y el desarrollo de tecnologías de donación, que aportaron los medios necesarios para crear un fragmento de DNA definido en cantidades suficientes para ejecutar los procedimientos bioquímicos necesarios. A mediados del decenio de 1970 se desarrollaron casi simultáneamente dos metodologías de secuenciación de DNA: un método químico adoptado por Alan Maxam y Walter Gilbert de la Harvard University, y una estrategia enzimática creada por Sangery A.R.Coulson del Medital Reseatrhauncilen Cambridge, Inglaterra. Una vez que se ha determinado la secuencia de nucleótidos de un segmento de DNA, es posible emplear diversas herramientas de software para analizarla. Por ejemplo, la secuencia de aminoácidos codificada por el DNA puede determinarse y compararse con otras secuencias de aminoácidos conocidas para obtener información acerca de la posible función del polipéptido. La secuencia de aminoácidos también aporta indicios respecto a la estructura terciaria de la proteína, en particular las partes del polipéptido que podrían actuar como segmentos que cruzan la membrana de proteínas integrales de membrana. La secuencia de nucleótidos misma también puede compararse con otras conocidas. Tales comparaciones pueden usarse para evaluar la relación o historia evolutiva de las secuencias de DNA, para identificar el fragmento de DNA que acaba de secuenciarse, o para comparar las características genómicas de diversos organismos o individuos.

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