Acción de lactasa

Acción de lactasa

Análisis gráfico 24

Acción de lactasa

de gas CO2 )

La lactosa, un azúcar disacárido que se encuentra naturalmente en la leche de los mamíferos, es utilizada por los bebés como una de sus fuentes iniciales de energía. Durante la infancia, la leche materna suele ser la única fuente de nutrición del niño. Este azúcar de la leche, la lactosa, debe sufrir una reacción enzimática que separa la molécula de disacárido en dos monosacáridos; glucosa y galactosa. Esta acción se lleva a cabo en las células que recubren el intestino delgado. La enzima que facilita esta reacción se llama lactasa. Después de la división, las moléculas de azúcar simples resultantes se liberan y la enzima lactasa está disponible para reaccionar nuevamente. Las moléculas de glucosa se absorben y transportan al hígado, mientras que las moléculas de galactosa experimentan otra reacción enzimática que las convierte en glucosa.

La utilización humana de la leche como fuente de alimento varía en todo el mundo. La producción adaptativa de suficiente lactasa es un rasgo expresado en culturas que dependieron de los productos lácteos durante generaciones. Las personas de culturas que no dependen de los productos lácteos son propensas a la intolerancia a la lactosa y pierden el nivel de producción de lactasa necesario para metabolizar la molécula de lactosa de la leche. Cuando la lactosa de la dieta escapa a la acción de la lactasa, la molécula pasa al intestino grueso, donde se somete a la fermentación bacteriana. A medida que aumentan las cantidades de lactosa que pasan por el intestino delgado sin conversión, las bacterias anaerobias del colon aumentan la producción de gases fermentativos y las molestias, síntomas típicos de la intolerancia a la lactosa.

En esta práctica de laboratorio, evaluará el funcionamiento de la lactasa. Una forma es determinar si la enzima está convirtiendo el disacárido en glucosa y galactosa midiendo la cantidad de glucosa producida. Puede usar tiras reactivas de glucosa, hechas originalmente para diabéticos, para detectar los niveles de glucosa. La tira de prueba cambia a una gama de colores para indicar la concentración de azúcar en la solución.

Una prueba alternativa para la actividad de lactasa mide la producción de gas CO 2 por la levadura. Presumiblemente, la levadura no puede digerir la lactosa. La levadura metaboliza la glucosa aeróbicamente durante la respiración, según la ecuación

C 6 H l2 O 6 + 6 O 2 → 6 CO 2 + 6 H 2 O + energía

Se produce agua y se libera CO 2 a medida que el azúcar se descompone en la glucólisis. Al monitorear la producción de CO 2 , podemos usar la levadura para indicar la actividad de lactasa.

OBJETIVOS

• Probar la acción de la lactasa.
• Use papel de prueba de glucosa para controlar la presencia de glucosa.
• Determine si la levadura puede metabolizar glucosa, lactosa o galactosa.

MATERIALES

Chromebook, computadora o dispositivo móvil

Aplicación de análisis gráfico 4

Vaya directo al gas CO 2

solución de lactasa

solución de galactosa al 5%

solución de glucosa al 5%

solución de lactosa al 5%

Probeta graduada de 10 ml

Vaso de precipitados de 600 mL (para baño María)

pipeta beral

tres tubos de ensayo de 18 × 150 mm

Gradilla

agua fría y caliente

cronógrafo

Tes-Tape u otro papel de prueba de glucosa

termómetro

suspensión de levadura

gafas de protección

PROCEDIMIENTO

Parte I Pruebas para la producción de glucosa

1. Obtenga dos tubos de ensayo y etiquételos como tubo de ensayo 1 y tubo de ensayo 2.
2. Obtenga la solución de azúcar de lactosa. Agregue 2,5 mL de la solución de azúcar a ambos tubos de ensayo, como se indica en la Tabla 1. Nota : No agregue la lactasa al tubo de ensayo hasta el Paso 7.

1. Prepare un baño de agua para las soluciones de azúcar. El nivel del agua en el tanque debe cubrir 3/4 o más del tubo de ensayo mientras mantiene una temperatura entre 35°C y 37°C. Si no se dispone de un baño de agua automatizado, combine un poco de agua tibia y fría en el vaso de precipitados de 600 ml para establecer y mantener un baño a 35–37 °C. Nota : si necesita agregar más agua caliente o fría para mantener una temperatura constante, primero retire la misma cantidad de agua que agregará o el vaso podría desbordarse.
2. Medir la concentración de glucosa.

1. Si el papel de prueba se suministra en una tira continua, corte un trozo pequeño (0,5 cm) de papel de prueba de glucosa. De lo contrario, obtenga una tira reactiva.
2. Usando una pipeta limpia, extraiga una o dos gotas de solución de azúcar del tubo de ensayo 1.
3. Coloque una gota de solución de azúcar en el papel de prueba de glucosa.
4. Siga las instrucciones en el paquete de papel de prueba de glucosa para desarrollar el papel de prueba. Esto generalmente requiere una espera de 30 o 60 segundos antes de comparar el color de la cinta con la tabla de colores suministrada.
5. Registre la concentración aproximada de glucosa en la Tabla 3.
6. Deseche cualquier resto de solución de azúcar en el gotero. Enjuague el cuentagotas tomando agua limpia y expulsándola en un vaso de precipitados.

1. Repita el paso 4 para el segundo tubo de ensayo.
2. Coloque 2 gotas de solución de lactasa en el tubo de ensayo 1 solamente. Mezcle suavemente el contenido del tubo.
3. Coloque ambos tubos de ensayo en el baño de agua y comience a cronometrar. Asegúrese de mantener la temperatura del baño de agua en el rango de 35 a 37 °C.
4. Incube los tubos de ensayo durante 10 minutos, realizando una prueba de glucosa una vez cada minuto durante 10 minutos. Repita el Paso 4 y registre las concentraciones de glucosa en la Tabla 3 una vez por minuto.

Parte II Pruebas de la capacidad de la levadura para metabolizar azúcares

1. Inicie el análisis gráfico. Conecte el sensor de gas CO 2 a su Chromebook, computadora o dispositivo móvil.
2. Configure el modo de recopilación de datos.

1. Haga clic o toque Modo para abrir la Configuración de recopilación de datos.
2. Cambie la recopilación final a 240 s. Haga clic o toque Listo.

1. Realizará una de las cinco pruebas descritas en la Tabla 2 y obtendrá los resultados de las otras pruebas de sus compañeros de clase. Pregúntele a su instructor qué prueba realizará y registre el número de la prueba en la Tabla 4.

1. Preparar la solución de azúcar/levadura.

1. Coloque 2,5 ml de la solución de azúcar asignada en un tubo de ensayo limpio.
2. Obtenga la suspensión de levadura. Agite suavemente la suspensión de levadura para mezclar la levadura que se deposita en el fondo. Agregue 2,5 ml de levadura al tubo de ensayo y mezcle la solución.
3. Si está realizando la prueba 1, agregue 8 gotas de enzima.

1. Transfiera toda la solución de azúcar/levadura del tubo de ensayo a la cámara de respiración de 250 ml.
2. Coloque rápidamente el eje del sensor de gas CO 2 en la abertura de la cámara de respiración. Empuje suavemente el sensor hacia abajo en la botella hasta que encaje perfectamente.
3. Haga clic o toque Recopilar para iniciar la recopilación de datos.
4. La recopilación de datos finalizará después de 4 minutos. Retire el sensor de gas CO 2 de la cámara de respiración.
5. Llene la cámara de respiración con agua y luego vacíela. Asegúrese de que toda la levadura se haya eliminado de la cámara de respiración. Seque completamente el interior de la cámara de respiración con una toalla de papel.
6. Si el tiempo lo permite, repita los pasos 12 a 17 para otra de las soluciones.

PROCESAMIENTO DE DATOS

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