BACTERIAS ANAEROBIAS.

RESUMEN: Las bacterias anaeróbicas son aquellas que no utilizan el oxígeno como aceptor final de electrones, y que no poseen las enzimas necesarias para su degradación y así evitar que sea tóxico para la bacteria; se observan como bacilos gram positivos Clostridium es una de dichas bacterias anaerobias, que poseen gran resistencia debido a su producción de endosporas. El objetivo fue la determinación de la especie de Clostridium presente en una muestra de heces provenientes de el establo de la UACJ, para esto se tomó la muestra en un medio líquido de tioglicolato, para eliminar las bacterias aeróbicas, seguido se sembró en un medio agar-sangre y en un medio Clostrisel selectivo para Clostridium, así como en las pruebas bioquímicas de fermentación de carbohidratos (glucosa, maltosa, lactosa, sacarosa) de los cuales solo lactosa resultó positiva; prueba de gelatinasa, que fue positiva; prueba SIM, para el cual solo la movilidad resultó positiva; prueba de reducción de nitratos que fue positiva; catalasa que resultó al igual positiva; hidrólisis de la caseína, tanto en leche que presentó hidrólisis positiva, como en tubo que presentó tumultos en el medio. Realizando una comparación entre los resultados obtenidos se concluyó que no se trataba de una bacteria del género Clostridium, sino que los resultados correspondían a una bacteria del género Bacillus, y tomando en cuenta que fue capaz de fermentar la glucosa, la probabilidad de que se trate de una bacteria Bacillus cereus es muy alta. Serían necesarias más pruebas bioquímicas para tener una mayor seguridad.

INTRODUCCIÓN:

Las bacterias del género Clostridium se caracterizan por ser bacilos Gram +, largos, anaerobios estrictos, formadores de endosporas. Muchos son proteolíticos, y sintetizan toxinas. Están presentes en el suelo, agua, forman parte de la microbita gastrointestinal de animales y humanos. Su capacidad de producir enfermedades se debe a la capacidad de supervivencia en condiciones ambientales extremas mediante la formación de esporas, el crecimiento rápido en un ambiente privado de oxígeno, y la producción de toxinas neurotóxicas.

Las bacterias anaerobias en general tienen características morfológicas y de tinción que son sugestivos, se observan como bacilos gram negativos decolorados o mal teñidos.

(Corzo, 2009)

El medio de cultivo de tioglicolato, tiene como componente principal la tripteína de soya. Este permite el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los nutricionalmente exigentes. Además, se observa que las bacterias estrictamente aerobias crecen en la parte superior, mientras que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las profundidades del medio. Las sustancias reductoras como tioglicolato de sodio y cisteína proporcionan una anaerobiosis suficiente y debido a los grupos –SH- de estos compuestos, se neutralizan efectos bacteriostáticos de los derivados mercuriales, arsenicales y de otros metales pesados. La presencia de una baja cantidad de agar, retarde la dispersión de CO2 y O2.

(Britannia Laboratorios, 2010)

El genero Clostridium carece de citocromos necesarios para el transporte de electrones, de catalasas y peroxidasas.

La mayoría produce grandes cantidades de gas (CO2 e H2) por fermentación butírica. Fermenta varios azúcares lo que permite la diferenciación de especies junto con reacciones bioquímicas como: Liquefacción de la gelatina, reducción de nitratos, producción de indol a partir de triptófano.

Existen especies proteoliticas y otras sacarolíticas.

(Bravo, 2005)

El medio Clostricell es un agar selectivo utilizado para el aislamiento de el genero Clostridia de una muestra mixta. Contiene “Tryptic Soy Broth” o TBS, así como tioglicolato y formaldehido de sodio que provee un potencial de oxidación-reducción bajo, el que es necesario para el crecimiento de anaerobios obligados. Se inhiben las bacterias entéricas, Pseudomonas, Proteus y organismos Gram Positivos, exceptuando Enterococos. Esto es debido a la adición de neomizida y ázida de sodio.

(Alpha Biosciences, 2010)

Bacillus spp. se trata de bacterias en forma de bacilos, largas y anchas, Gram positivas y pueden producir endosporas. En general son catalasa positivos, negativos a la formación de indol, Bacillus subtilis no fermenta la glucosa, mientras que Bacillus cereus sí lleva acabo esta fermentación, sin embargo ninguna de ellas puede llevar acabo la fermentación de la lactosa, mientras que Bacillus polymyxa sí; las tres pueden reducir nitrato a nitritos, dando un resultado positivo, así como las tres también resultan con motilidad positiva en un medio semisólido.

(Microbiology Labs, 2012)

OBJETIVO:

Determinación de una especie bacteriana mediante pruebas bioquímicas, y determinación de la presencia de Clostridium spp.

MATERIALES Y MÉTODOS:

Para la realización de la práctica, se tomó primeramente una muestra de estiércol procedente de los establos localizados en el área de veterinaria de la Universidad Autónoma de Ciudad Juárez; la muestra fue tomada con un abatelenguas de madera, y se agregó a un medio líquido con Tioglicolato el cual reduce los microorganismos aeróbicos, y ayuda en el crecimiento de los microorganismos anaeróbicos. Se agitó la muestra en dicho medio por algunos minutos y utilizando la fuerza necesaria para que se agitara de la mejor manera posible; después se dejó sedimentar por unos pocos minutos más hasta que la mayor cantidad de manera orgánica se encontrara en el fondo del tubo. Se tomó un asa y se esterilizó directamente con la flama procedente de un mechero de bunsen, hasta que se encontrara de un color rojo vivo; seguido se tomó el tubo con una mano, utilizando el dedo índice y el pulgar de la misma mano se procuró abrir el tubo, procurando mantenerse cerca de la flama del mechero para evitar la contaminación; se enfrió el asa en las paredes del tubo, y hecho esto se procedió a tomar una muestra del medio líquido que contenía la materia orgánica; de esta manera se sembró en varios medios y pruebas bioquímicas para la determinación de la presencia de Clostridium spp.

En cuanto a medios sólidos en caja de Petri se sembró en medio por el método de estría cruzada en cuatro cuadrantes en los medios agar-sangre, así como en medio clostrisel que es selectivo a Clostridium spp., y por último en agar leche.

En cuanto a medios líquidos se sembró leche en tubo, así como en diferentes pruebas de fermentación líquidas como glucosa, maltosa, sacarosa, y lactosa, al igual que en prueba de nitratos, en dichas pruebas se tomó la muestra como se menciona anteriormente, y se inoculó sumergiendo el asa en el medio que contenía la muestra para seguido girar dentro del medio que

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