Bacteria E.Coli

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE LA BACTERIA Escherichia Coli.

Morales Lugo, H. A., Hernández Hinostroza, K. A., Valenzuela Nehmad, Y. A., Simental Duarte, S., Espriu Ramos, M.

Instituto Tecnológico de Sonora, Av. Antonio Caso 2266, Villa Itson, 85130 Ciudad Obregón, SON

Teléfono: 01 644 410 0900

Palabras Clave: Aislamiento, identificación, Bacteria

Resumen.

Las bacterias del género E. coli son Gram-negativas, tienen forma de bacilo corto y pertenecen a la familia Enterobacteriaceae. Se trata de una bacteria unicelular que se encuentra generalmente en los intestinos animales y humanos, por ende en las aguas negras. Fue descrita por primera vez por Theodore Escherich en 1885 .

La preparación de un cultivo puro implica no sólo el aislamiento de un determinado microorganismo partir de una población microbiana mixta, sino también el mantenimiento del individuo aislado.

El objetivo es obtener un cultivo puro de la bacteria E. Coli mediante el aislamiento en base a las Normas Oficiales Mexicanas a partir de una muestra problema para su posterior identificación con la realización de tinciones y pruebas bioquímicas.

La muestra problema procedente del Cepario del Laboratorio de Investigación en Microbiología por conteniendo ésta un cultivo mixto de bacteria, hongo y levadura.

Se utilizo el método de diluciones de acuerdo a la NOM-110-SSA1-1994 para la preparación y dilución de la muestra y poder realizar el método de vaciado en placa como lo establece la NOM-092-SSA1-1994 para realizar el conteo de las UFC/mL de muestra. Lo siguiente consistió en realizar las pruebas bioquímicas que nos permitirían la identificación de la bacteria.

El resultado de la Cuenta Total Viable de Microorganismos Mesofilos Aerobios mostró un valor de 6, 700, 000 de UFC/mL, la tinción Gram nos permitió observar que se trataba de una bacteria bacilo corto Gram negativo.

El aislamiento de cualquier microorganismo no necesariamente de una bacteria es indispensable para lograr determinar cuál es el tipo de microorganismo que se encuentra contaminando ya sea un alimento o también agua. En este caso el aislamiento de una bacteria permite la identificación y extracción de la especie para poder ser analizada.

Introducción.

Las bacterias del género E. coli son Gram-negativas, tienen forma de bacilo corto y pertenecen a la familia Enterobacteriaceae. Esta bacteria es quizás el organismo procarionte más estudiado por el ser humano, se trata de una bacteria unicelular que se encuentra generalmente en los intestinos animales y humanos, por ende en las aguas negras. Ésta bacteria es necesaria para el funcionamiento correcto del proceso digestivo, además produce vitaminas B y K.

Se destruye a temperatura de pasteurización y también durante su almacenamiento en frio, sobre todo a temperatura de congelación. Su escasa resistencia hace que no sea un buen indicador de flora patógena; así, por ejemplo, es mucho menos resistente que la Salmonella a las condiciones ambientales o la acción del frio (1).

Fue descrita por primera vez por Theodore Escherich en 1885 y su hallazgo inició el uso de E. coli como un microorganismo genético modelo. Es una bacteria utilizada frecuentemente en experimentos de genética y biotecnología molecular; su doble ventaja es la rápida multiplicación y el pequeño tamaño. En condiciones óptimas, este microorganismo puede reproducirse cada 20 minutos y, en apenas 7 horas, una célula bacteriana sola puede dar origen a más de 2 millones de descendientes (2).

La preparación de un cultivo puro implica no sólo el aislamiento de un determinado microorganismo a partir de una población microbiana natural mixta, sino también el mantenimiento del individuo aislado y de su descendencia, en un ambiente artificial al que se impide el acceso de otros microorganismos.

Los microorganismos no requieren de mucho espacio para su desarrollo; de ahí que pueda crearse un ambiente artificial dentro de los confines de un tubo de ensayo, un matraz o de una placa Petri, los tres tipos de recipiente más comúnmente utilizados para cultivar microorganismos. El recipiente de cultivo debe estar inicialmente estéril y después de la introducción del tipo de microorganismo deseado debe estar protegido de una posterior contaminación externa. La manera más fácil de obtener cultivos puros de los microorganismos que forman colonias discretas sobre medios sólidos se lleva a cabo utilizando una de las modificaciones del método de siembra en placa. Este método implica la separación e inmovilización de los organismos particularmente sobre o dentro de un medio nutritivo solidificado por agar o algún otro agente gelificante adecuado. Cada organismo viable da origen, al multiplicarse, a una colonia de la cual pueden hacerse transferencias fácilmente.

Los aislamientos pueden hacerse con placas sembradas por vertido, para lo cual sucesivas diluciones del inoculo se van colocando en el medio de agar fundido, pero enfriado, que se deja entonces solidificar. La siembra por estrías es, en general, el método más útil de sembrar en placa. Un alambre con un aro en la punta (asa de cultivo) se esteriliza e introduce en una suspensión, convenientemente diluida, de organismos y se utiliza luego para hacer una serie de estrías paralelas, no superpuestas,

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