Bioquimica

MARCO TEÒRICO

Obtenciòn y análisis de fracciones celulares

Las diferente metodologías utilizadas para el estudio de la composición celular, entre ellas las técnicas bioquímicas, fisiológicas y citològicas. Permiten analizar en gran medida la anatomía y localización de las estructuras y organelas celulares. Sin embargo, si se desea profundizar en la funcionabilidad de cada componente celular se deben realizar ensayos bioquímicos y fisiológicos. Generealmente el primer paso es obtener fracciones enqiquecidas con las distintas estructuras u organelas.

Una de las técnicas màs utilizadas para obtener dichas fracciones es el Fraccionamiento Celular, el cual es un conjunto de procedimientos que tienen como principal objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas de un determinado componente celular, ya sea este una organela como el núcleo, mitocondrias, lisosomas, peroxisomas, etc. Y dependiendo del estudio que se desee elaborar la fracción celular también se puede estar compuesta por restos de membrana celular o por complejos multiproteicos como el citoesqueleto de actina, microtùbulos y poros nucleares.

Todo proceso de Fraccionamiento Celular tiene dos etapas:

Homogenizado

Ruptura de las células o tejidos para obtener un lisado celular (o tisular), de tal modo que se liberen sus componentes, en particular sus organelas, sin que estos sufran mayores daños y que se encuentren en condiciones adecuadas para su purificación,. Para el caso de la ruptura celular, también existen diversas alternativas como es; el método mecànico, donde se hace uso de instrumentoascomo el mortero, pinzas homogeneizadores y ultrasonido que permiten la disgregación y lisis celular. Pero si se deseapartir de un cultivo celular, no es necesario separar las células y se pasa directamente a la lisis celular. En el caso del método quìmico, el uso de detergentes, enzimas y el shock osmòtico. Tambièn cumplen con la función de romper y lisar la membrana celular.

Centrifugado (centrifugación diferencial)

Una vez que se tienen todos los componentes celulares libres, es necesario separarlos en fracciones, es decir, realizar su fraccionamiento y el método màs utilizado para este fin es la centrifugación diferencial; cuando los diferentes componentes celularesse encuentran suspendido en un lìquido, tienden a sedimentarhacia el fondo por efecto de la gravedad. Para acelerar este proceso, se puede colocar a un tubo conteniendo esta suspensión en un rotor giratorio, de forma de someter a las partículas a una fuerza centrìfuga.

Objetivos

1. Obtenciòn de fracciones celulares a partir de hígado de pollo.

2. Determinaciòn del rendimiento y pureza de cada fracción.

3. Conocer la técnica de fraccionamiento celular para el estudio de las organelas celulares.

4. Usar colorantes

...