Bioquimica

PRUEBAS ANALÍTICAS DE LABORATORIO

Los resultados de las pruebas analíticas pueden ayudar en:

• La identificación de una enfermedad oculta

• La prevención de daño irreversible.

• El diagnostico precoz tras la aparición de signos y síntomas.

• El diagnóstico diferencial de varias enfermedades posibles.

• La determinación de la fase de la enfermedad

• El cálculo de la actividad de la enfermedad.

• El central efecto del tratamiento

• El genético en enfermedades familiares

• Problemas médicos legales como las pruebas de paternidad

Se tiene como objetivo la menor cantidad de:

Duplicación de pruebas.

Perdida de dinero por parte del paciente.

Sobrecargo de instalación y del personal de laboratorio

El objetivo de cualquier prueba analítica, radiológica, cardiografía, es reducir la inseguridad clínica. El grado de reducción de esta inseguridad varía en función de las características de la prueba y de la situación clínica. La medicina moderna ha superado la máxima de Voltaire, según la cual “el arte de la medicina consiste en entender al paciente, mientras la naturaleza cura la enfermedad”.

A continuación se presentan algunos principios importantes sobre el uso de las pruebas analíticas:

1. Incluso en las mejores circunstancias, ninguna prueba es perfecta, y en algún caso específico el resultado puede incluir un error.

2. La elección de la pruebas debe basarse en la probabilidad previa diagnostica que se está buscando, lo que influye en el valor predictivo de la prueba.

3. En la mayor parte de las determinaciones analíticas, la combinación de variación fisiológica a corto plazo error analítico es suficiente para dificultar la interpretación de determinaciones únicas, cuando los concentres se encuentran en el intervalo limite o dudoso.

4. Hay que evitar los errores analíticos aleatorios incluidos los cambios de temperatura, volumen de reactivo de la muestra.

MÉTODOS DE LABORATORIO CLÍNICO PARA LA DETECCIÓN DE ANTÍGENOS Y ANTICUERPOS.

La presencia de un anticuerpo dirigido contra una proteína o compuesto definido depende de la respuesta inmune del paciente; la detección de anticuerpos se utiliza para evaluar de manera cuantitativa y cualitativa de las respuestas inmunitarias normales y anormales. La detección de antígenos por lo general se utiliza para determinar la presencia de proteína so compuestos extraños.

Unión antígeno-anticuerpo

El proceso de la unión antígeno-anticuerpo; en su forma más simple, un anticuerpo monoclonal (mAb) especifico se utiliza para encontrar un solo epitopo antigénico, en tanto que la formación del complejo inmune se monitorea mediante la precipitación del complejo o por medio de la presencia de etiquetas sobre el anticuerpo. De manera reciprocara, el uso de proteínas clonadas molecularmente como antígenos modelo se aplica para la identificación de anticuerpos específicos que reconocen tales tipos de proteínas, más aun a través de esta metodología puede determinar el isotopo de los anticuerpos reactores (IgG, IgE o IgM).

La inmunoprecipitación

Se produce cuando el antígeno o el anticuerpo se separa del complejo inmune sea separado del resto de los componentes de la mezcla. Cuando los anticuerpos y sus antígenos se encuentran presentes en proporciones equimorales, estos forman complejos insolubles que precipitan de manera natural. La precipitación máxima tiene lugar cuando las concentraciones de antígeno-anticuerpo son equivalentes (zona de equivalencia) y cuando las cantidades cada vez menores se forman en zonas donde existe exceso de antígeno del anticuerpo. El fenómeno prozona se suscita cuando existen cantidades excesivas del anticuerpo o del antígeno con la formación subsecuente de complejos inmunitarios subóptimos.

MÉTODOS DE LABORATORIO QUE DEPENDEN DE LA FORMACIÓN DE COMPLEJOS INMUNITARIOS

 Inmunodifusión: es una técnica simple mediante la cual los antígenos y anticuerpos se colocan en contenedores separados dentro de un soporte semisólido y posteriormente se les permite mezclarse a través del soporte por medio de difusión. Cuando se alcanza una zona de equivalencia, entonces aparece un alinea de precipitación, la cual resulta visible cuando se deja pasar la luz ca través del gel. La difusión doble en agar (análisis de Oucherlony) sirve para caracterizar la relación entre diferentes antígenos. Los antígenos se colocan en contendores de agar y el anticuerpo se coloca en un contendor central se permite que los reactivos se difundan en conjunto y que la naturaleza de las líneas de precipitación entre los contenedores se identifique. Los métodos de Inmunodifusión tiene limitaciones en términos de insensibilidad porque requieren cantidades relativamente grandes de antígenos o anticuerpos precipitantes; la velocidad de difusión hace de esta prueba un método que consume mucho tiempo.

 Nefelometría: la formación de complejos inmunitarios en una a solución se monitorea mediante espectrometría. La dispersión de un rayo de luz incidente se utiliza para detectar complejos en soluciones diluidas de antígenos y anticuerpos. La determinación nefelometrica de antígenos se lleva a cabo a través de la adición de cantidades constantes de anticuerpos específico altamente purificado y ópticamente claro o cantidades variables de antígeno. Los nefelómetros modernos sustraen la luz dispersa de origen, previamente la adición del antisuero y posteriormente miden la formación de complejos inmunitarios en forma continua. Los nefelómetros automáticos confirman que la reacción se encuentra en exceso de anticuerpos mediante la adición de cantidades conocidas de cada antígeno analizado (calibradores). La nefelometría se emplea para medir los valores de una gran variedad de antígenos y proteínas séricas.

 Fijación al complemento: la formación de complejos inmunitarios en solución puede también monitorearse midiendo la capacidad de tales complejos para fijarse y consumir proteínas del complemento. El ensayo de fijación al complemento (CF) es una reacción de dos etapas: en la primera etapa el antígeno se mezcla con el suero del paciente que contiene un cantidad conocida del complemento. La segunda etapa se determina la cantidad activa hemolítica residual del complemento.

 Crioglobulinas: las Crioglobulinas son inmunoglobulinas séricas (IgS) que precipitan a temperaturas menores de 37°C. la presencia de Crioglobulinas en la sangre se determina mediante la incubación de especímenes de suero a 4° durante varias horas y después se investiga la formación de un precipitado, posteriormente las proteínas precipitada se aíslan por medio

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