Crecimiento Microbiano

RESUMEN

Se dispuso a medir la constante KM para la Saccharomyces Cerevisiae a partir de datos experimentales en tres experimentos utilizando cualquier ecuación de crecimiento microbiano antes visto en clase. Par así poder determinar la cte Km a partir de datos experimentales.

INTRODUCCIÓN

El Km es la afinidad de la enzima por el sustrato, la medida de la concentración de sustrato necesaria para que se produzca una catálisis eficaz. Se le denomino constante de Michaelis, pues cuando una enzima reacciona con 2 o más sustratos, la Km es la relación de las constantes de cada sustrato para determinar la velocidad para una determinada reacción.

Si S< Km----proporcional - menos afinidad

Si S > Km----Velocidad máxima - mas afinidad

Si S = Km----estado de equilibrio

Dentro de las enzimas hay algunos factores que influyen en la velocidad de as reacciones tales como la temperatura y el pH.

• Temperatura: Un aumento en la temperatura provoca un aumento de la velocidad de reacción hasta cierta temperatura óptima, ya después de aproximadamente 45°C se comienza a producir la desnaturalización térmica.

• pH: No afecta la actividad enzimática directamente sino que modifica la concentración de protones; la concentración de protones afecta directamente la velocidad de la reacción. Cualquier cambio brusco de pH altera el carácter iónico de los grupos amino y carboxilo en la superficie proteica.

Materiales y métodos

3 Problemas propuestos con datos experimentales realziados en el laboratorio

Ecuaciones de cineticamicrobiana.

Metodos

Problema 1

Con base a la tabla de [s] se procedió a identificar los datos según la ecuación de los dobles inversos o de Lineweaver-Burk por razones de simplificación.

Una vez identificados los datos se procedió a despejar la ecuación de modo que sea posible calcular la cte Km.

Sustrato Valores v y vmax KM

4.11 8.62*10^-17 2.05*10-13

4.08 4.53*10^-14 1.84*10-13

h3.94 3.99*10^-14 1.57*10-13

3.93 2.49*10^-14 9.785*10-14

3.91 7.91*10^-15 3.09281*10-14

3.90 7.67*10-15 1.82*10-14

v.60 4.26*10^-15 1.5336*10-14

3.49 3.61*10^-15 1.25*10-14

0.94 3.13*10^-16 2.94*10-16

0.83 1.63*10^-16 1.3557*10-16

0.79 4.36*10^-17 3.44*10-17

0.74 1.5793*10^-17 1.168*10-17

0.71 9.8998*10^-19 7.09*10-17

Tabla 1. Resultados de la cte KM con disminución en su valor al caer la cantidad de sustrato.

En base a los datos obtenidos se obtuvo que la cte. Km disminuye según el número de células aumenta.

Esto se debe a que como el sustrato se está agotando la cte. de sustrato y velocidad por lo tanto también tiene que disminuir.

Experimento 2

Inoculación en los medios de cultivo

Se tomaron 2 ml del tubo falcón con la Saccharomyces cerevisiae activa y se vertieron en 250 ml del medio de cultivo contenidos en un matraz Erlenmeyer. Se prepararon 3 matraces los cuales se mantuvieron a temperatura ambiente sin agitación.

Tabla 1. Observaciones de crecimiento microbiológico en el

...