Cultivo De Muestra Faringea

OBTENCION DE CULTIVOS PUROS: SIEMBRA Y AISLAMIENTO

SIEMBRA O CULTIVO: es la operación que consiste en depositar asépticamente microorganismos en un medio de cultivo

Principios Generales

1. Practicar la siembra en medios de cultivos previamente esterilizados y adecuados para la bacteria que se desea aislar 2. Emplear instrumentos estériles 3. No contaminar ni destruir los microorganismos 4. Depositar los microorganismos asépticamente en los medios de cultivo 5. Esterilizar los instrumentos empleados, inmediatamente después de cada operación

Los instrumentos empleados corrientemente en la siembra son:

1. Asa de Siembra: se utiliza alambre de platino, o alambre de una aleación niquel-cromo (nicrom) que tiene propiedades semejantes a la primera, con la ventaja de ser de menor costo. Este alambre tiene un diámetro de 0,3 a1 mm y está sujeto a un mango o porta asa metálico o de vidrio. El alambre puede ser totalmente recto (asa en punta o aguja), recto con un anillo de aproximadamente 3 mm de diámetro en la extremidad (asa) o aplastado en el extremo (espátula). Puesto a la llama del mechero alcanza rápidamente el rojo blanco ( 1.300°C ) y también rápidamente se enfría.

2. Pipeta Pasteur: es un tubo de vidrio con una extremidad afilada u cerrada. La otra extremidad que se encuentra abierta está protegida por una mota de algodón cardé o hidrófobo.

La técnica general de siembra dependerá de:

a) Estado físico del material a sembrar ( sólido o líquido ) b) Estado físico del medio de cultivo ( agar o caldo ) c) Ambiente en el cual crece el microorganismo ( aerobiosis, microaerofilia o anaerobiosis )

SIEMBRA EN ANAEROBIOSIS

Los medios de cultivo para las bacterias anaerobias poseen en general las mismas sustancias nutritivas que para las bacterias aerobias, pero es necesario privarlos del O2 libre o en disolución mediante distintos métodos:

Métodos Físicos:

a) Expulsión del aire por ebullición: antes de efectuar la siembra, los medios líquidos y sólidos se llevan a ebullición en baño María con el fin de eliminar el aire. Este proceso se denomina “regeneración” de los medios. Esto evita el reoxigenamiento de los medios líquidos.

b) Reemplazo del aire por gases inertes: este método consiste en la eliminación del aire, mediante bomba de vacío, del recipiente que contiene los medios sembrados y su reemplazo por Hidrógeno, Nitrógeno, CO2, etc.

Métodos Químicos:

a) Sustancias reductoras tóxicas para las bacterias, por cuyo motivo no se adicionan a los medios de cultivo, sino que en un lugar adecuado del recipiente que contiene los tubos sembrados. Se utiliza principalmente Acido Pirogálico o Hidróxido de potasio

b) Sustancias reductoras no tóxicas que se agregan directamente a los medios de

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