Curva de calibracion
Enviado por venusm2707 • 11 de Julio de 2020 • Tarea • 574 Palabras (3 Páginas) • 839 Visitas
TALLER 2
CURVA DE CALIBRACIÓN
Uno de los métodos más utilizados para determinar la concentración de una muestra problema, es el método de la curva de calibración. La curva de calibración relaciona la concentración de al menos cinco soluciones de estándar de concentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda máxima (λ max)
La ley combinada de Beer y Lambert expresa que: “la absorbancia de radiación electromagnética producida por una especie absorbente es directamente proporcional a la trayectoria de la radiación a través de la disolución y a la concentración en ésta de la sustancia que produce la absorción”
Para determinar el valor de la sustancia en las muestras se puede proceder de varias maneras: la gráfica Absorbancia vs. Concentración para extrapolar la absorbancia y poder estimar la concentración de un desconocido, un análisis de regresión con una calculadora o computador que tenga un paquete estadístico básico o a través del método del FACTOR.
Obsérvese los siguientes datos de cuantificación de proteínas por el Método de BIURET
Tabla No. 1 Resultados de absorbancia a diferentes concentraciones de Proteína
ESTANDAR mg/dL | ABSORBANCIA | FACTOR DE CADA ESTANDAR |
[ ] | Abs | [ ] / Abs |
20 | 0,12 | 166,7 |
40 | 0,22 | 181,8 |
80 | 0,4 | 200,0 |
160 | 0,9 | 177,8 |
320 | 1,9 | 168,4 |
Promedio | 178,9 |
Figura No.1 Cuantificación de proteínas Método de Biuret[pic 1][pic 2]
Observaciones:
Los resultados están sujetos a variaciones debido a factores como pipeteo, variaciones de voltaje en los equipos de lectura, temperaturas de incubación, entre otros, el límite permisible de variabilidad es del 5%.
Si se multiplica cualquier absorbancia de muestras en estudio por el factor promedio obtenido, se tendrá la concentración del desconocido, igual o mejor, que cuando se estima con una gráfica en papel milimetrado.
EJERCICIOS
Multiplicar las siguientes absorbancias de desconocidos por el anterior factor y determinar la concentración de estas muestras.
Tabla No. 2. Valores de Absorbancia para la siguiente muestra
Muestra-1 | Muestra-2 |
0.620 | 0.800 |
0.650 | 0.810 |
0.615 | 0.835 |
0.600 | 0.825 |
0.650 | 0.845 |
0.645 | 0.860 |
0.620 | 0.862 |
0.660 | 0.850 |
0.630 | 0.835 |
0.645 | 0.816 |
Calcular promedio (M), desviación Estándar (DS) y coeficiente de Variabilidad * (CV= (DS/M)*100 %) de cada Muestra
El CV es una medida de dispersión de los datos expresada en porcentaje.
Si los valores de Coeficiente de Variabilidad (CV) idealmente en pruebas de Bioquímica deben ser menores a 5 %, ¿Qué determinación muestra la mejor reproducibilidad (CV más bajo)?, ¿Cuáles determinaciones pueden ser aceptadas bajo este criterio?, ¿Cuáles rechazadas?
...