Curva de calibracion.

[pic 1][pic 2][pic 3][pic 4]UNIVERSIDAD DE AMÉRICA

[pic 5]

Vicerrectoría Académica y de Posgrados

Syllabus de Asignatura

[pic 6][pic 7][pic 8][pic 9][pic 10]

[pic 12][pic 13][pic 14][pic 15][pic 16][pic 17][pic 18][pic 19][pic 20][pic 21][pic 22]

1        INTRODUCCIÓN Y MARCO TEÓRICO:

La fermentación involucra el crecimiento de los microorganismos en un sustrato orgánico. Los productos de fermentación incluyen, los microorganismos, también como los productos orgánicos reducidos y oxidados. Los azúcares son un buen sustrato para que los microorganismos puedan crecer, ya que a partir de estos, se producen dichos compuestos orgánicos oxidados y reducidos. Los productos de fermentación varían de acuerdo al tipo de microorganismo, tipo de sustrato, y factores ambientales, tales como el pH y la temperatura. La fermentación acido láctica y alcohólica son dos rutas metabólicas comúnmente usadas por las células, para metabolizar azúcares. Las levaduras en mayor proporción la ruta de la fermentación alcohólica (en condiciones anaeróbicas). Una hexosa produce dos moles de CO2 y dos moles de etanol por gramo de azúcar (glucosa) utilizada. El rendimiento teórico de etanol es 51,1% en peso. El proceso genera dos moléculas de ATP por molécula de azúcar utilizada, el cual puede ser considerado como energía para los microorganismos. Algunos microorganismos, usan el oxígeno molecular, en su metabolismo y crecen aeróbicamente. Este proceso es conocido como respiración. La respiración es mucho más eficiente que el proceso de fermentación anaeróbico, ya que produce 38 moles de ATP por mol de azúcar utilizado. Saccharomyces cereviciae es capaz de crecer ya sea con presencia de oxígeno o sin presencia de este compuesto (Facultativo). Si hay suficiente O2 disponible, la levadura, preferirá el uso de la ruta metabólica de la respiración (ácidos tricarboxílicos), reduciendo el consumo de azúcares y la producción de etanol. Sin embargo hay una mayor generación de biomasa por unidad de azúcar consumido.

[pic 23][pic 24][pic 25][pic 26][pic 27][pic 28][pic 29][pic 30][pic 31][pic 32]

2        OBJETIVO(S):

Determinar los coeficientes de rendimiento de los compuestos que intervienen en la fermentación batch (por lotes) mediante el uso de técnicas experimentales y teóricas.

[pic 33][pic 34][pic 35][pic 36][pic 37][pic 38][pic 39][pic 40][pic 41][pic 42]

3        EQUIPOS, INSTRUMENTOS Y/O MATERIALES:

Equipos

∙

• pH-metro (2)

• Espectrofotómetro (con sus respectivas celdas)

• Balanza analítica (2)

• Balanza 300 gr a 3 kg (1)

• Plancha de calentamiento y agitación (2) con 2 agitadores magnéticos

• Baño Termostatado (1)

• Centrifuga (1)

• Shaker o agitador mecánico (1)

• Microscopio (1)

Reactivos

• Agua destilada

• NH3

• MgSO4*7H2O

[pic 43][pic 44]

1

[pic 45][pic 46][pic 47][pic 48]UNIVERSIDAD DE AMÉRICA

[pic 49]

Vicerrectoría Académica y de Posgrados

Syllabus de Asignatura

[pic 50][pic 51][pic 52][pic 53][pic 54][pic 55]

• CaCl2*2H2O

• K2HPO4

• Glucosa

• Levadura liofilizada o Fresca (estudiantes)

• Solución de DNS: Acido Dinitrosalicílico (según preparación IUPAC)

• Solución del glucosa (0.2 g/l)

• Reactivos tinción de gram (lugol, cristal violeta, acetona, safranina)

• Aceite de inmersión

• 2 litros solución medio de cultivo: NH3 3 gr/l; MgSO4*7H2O 0,11 g/l, CaCl2*2H2O

• 0,08 g/l, K2HPO4 2g/l y Glucosa 10 g/l. Ajustar pH de la solución a 5.

• 2 litros solución medio de cultivo: NH3 3 gr/l; MgSO4*7H2O 0,11 g/l, CaCl2*2H2O

• 0,08 g/l, K2HPO4 2g/l y Glucosa 15 g/l. Ajustar pH de la solución a 5.

Materiales

• Gasa (estudiantes)

• Algodón

• Erlenmeyer de 100 ml (2)

• Probeta de 100 ml (2)

• Tijeras (estudiante)

• Agitadores Magnéticos (1)

∙

• Vidrios de Reloj (2)[pic 56][pic 57]

• Papel o toallas para secar

• Tubos falcon (8)

• Micropipetas y puntas 2

• Alcoholímetro

• Pipetas 10 ml (2)

• Tubos de ensayo de 20 ml con tapa rosca (5)

• Vaso de precipitado de 500 ml (2)

• Tubos de ensayo de 10 ml (6)

• Porta objetos (estudiantes)

• Mecheros (1)

• Pipeteador (pera) (1)

• Pipetas pasteur

• Microespatulas (1)

• Gradilla (1)

Las cantidades señaladas frente a cada uno materiales se entienden para un grupo.

Trabajarán 5 grupos por práctica.

[pic 58][pic 59][pic 60][pic 61][pic 62][pic 63][pic 64][pic 65][pic 66][pic 67][pic 68][pic 69][pic 70][pic 71]

4        MÉTODOS Y PROCEDIMIENTOS:

[pic 72]

Preparación del medio de cultivo.

Prepare con la ayuda de una probeta de 100 ml, dos soluciones de 75 ml de medio de cultivo que contenga cada una los siguientes compuestos: NH3 3 gr/l; MgSO4*7H2O 0,11 g/l, CaCl2*2H2O 0,08 g/l, K2HPO4 2g/l. La glucosa se evaluará a dos concentraciones 10 y 15 g/l (de acuerdo al diseño del experimento consultar con el profesor el ensayo que le corresponde). Para tapar cada uno de los frascos haga tapones con la ayuda de gasa y algodón. Mida el pH de la solución y ajuste para dejarlo en un valor de 5. Una vez obtenido los medios (con su respectiva fuente de carbono), esterilizar cada uno en auto clave a 121 °C, 15 psi por 15 minutos. Si no se cuenta con autoclave, disminuya la carga bacteriana calentando el medio hasta ebullición dejando los medios a esa temperatura por 5 minutos. Dejar enfriar los medios a temperatura ambiente.

...