Determinación de un alcaloide (cannabis) en una muestra de orina por medio de pruebas presuntivas e inmunoensayo

TÍTULO: DETERMINACIÓN DE UN ALCALOIDE (CANNABIS) EN UNA MUESTRA DE ORINA POR MEDIO DE PRUEBAS PRESUNTIVAS E INMUNOENSAYO

Autores

Alvarado Gomez M., Lozano Ruiz, B., Terrazas Rodríguez, J.

Bioquímica Diagnóstica, Toxicología, Grupo 2701, Equipo 1,  28 de abril

Resumen

Se llama alcaloides a aquellos metabolitos secundarios de las plantas sintetizados, generalmente, a partir de aminoácidos, que tienen en común su hidrosolubilidad a pH ácido y su solubilidad en solventes orgánicos a pH alcalino. Los alcaloides verdaderos derivan de un aminoácido; por lo tanto, son nitrogenados.

La marihuana es la droga ilegal más comúnmente utilizada y sus ingredientes activos de la planta de marihuana se denominan cannabinoides; el principal cannabinoide vegetal psicoactivo es el delta-9-tetrahidrocannabinol (THC). Los síntomas de la intoxicación por cannabis incluyen: náuseas, vómitos, sequedad de boca, sed, palidez, hiperemia conjuntival y midriasis. Produce alteraciones de la conducta que varían desde la euforia a la crisis depresiva y de pánico.

Por ello, en este trabajo se presenta la exposición de alcaloides en una muestra de orina con presunta presencia de alguna droga. Con la acidificación de la orina a pH 4, se inició con la técnica de extracción del alcaloide donde se obtuvo la primera extracción etérea, la segunda fue a partir de la alcalinización a pH 9 de la fase acuosa obtenida de la primera extracción y así una tercera extracción obtenida de la fase acuosa de la segunda extracción con adición de cloroformo. A las extracciones se les realizaron pruebas presuntivas para evidenciar la presencia de alcaloides, donde la reacción de Dragendorff careció de un precipitado naranja dando un resultado negativo. De la misma manera, las pruebas de reacción de Mayer, reacción de Bouchardat y la reacción de Mandelin arrojaron resultados negativos ya que no presentaban ningún precipitado o cambio de color. Se finalizó con una determinación de alcaloides por inmunoensayo la cual después de estar expuesta 8 minutos en la prueba de orina evidenció la presencia del THC.

Palabras clave: Alcaloides, Cannabis, THC, Muestra de orina, Inmunoensayo, Pruebas presuntivas

Abstract

Alkaloids are secondary plant metabolites generally synthesized from amino acids, which have in common their water solubility at acid pH and their solubility in organic solvents at alkaline pH. True alkaloids are derived from an amino acid; therefore, they are nitrogenous.

Marijuana is the most commonly used illegal drug and its active ingredients from the marijuana plant are called cannabinoids; the main psychoactive plant cannabinoid is delta-9-tetrahydrocannabinol (THC). Symptoms of cannabis intoxication include: nausea, vomiting, dry mouth, thirst, pallor, conjunctival hyperemia and mydriasis. It produces behavioral alterations ranging from euphoria to depressive and panic crisis.

Therefore, in this work we present the exposure of alkaloids in a urine sample with suspected presence of some drug. With the acidification of the urine at pH 4, the alkaloid extraction technique was started, where the first ethereal extraction was obtained, the second was from the alkalinization at pH 9 of the aqueous phase obtained from the first extraction and a third extraction obtained from the aqueous phase of the second extraction with the addition of chloroform. The extractions were tested presumptively for the presence of alkaloids, where the Dragendorff reaction lacked an orange precipitate, giving a negative result. Likewise, the Mayer's Reaction, Bouchardart's Reaction and Mandelin's Reaction tests yielded negative results since they did not show any precipitate or color change. A determination of alkaloids by immunoassay was completed, which after being exposed for 8 minutes in the urine test evidenced the presence of THC.

Key words: Alkaloids, Cannabis, THC, Urine sample, Immunoassay, Presumptive evidence

Introducción

Casi todas las sustancias adictivas y los calmantes del dolor son de origen vegetal, y casi todas son alcaloides. Los alcaloides poseen cualidades muy potentes (analgésicas, anestésicas, hipnóticas, tranquilizantes, relajantes, calmantes, cardiotónicas, diuréticas, febrífugas, vasodilatadoras, vasoconstrictoras, paralizantes  y un largo etcétera).Ahora esas propiedades han sido aprovechadas para crear las llamadas ‘drogas recreacionales’,que consumen por lo regular los jóvenes. 1

El cannabis habitualmente se fuma (vía intrapulmonar), ya que ésta es la vía de consumo más eficiente. La cantidad final de THC absorbido en el organismo depende de la cantidad de cigarrillos y de la potencia de los cigarrillos. El THC se detecta en sangre inmediatamente después del primer cigarrillo (1-2 minutos) y las concentraciones máximas se alcanzan entre los 3 y 10 minutos. Los efectos se inician entre segundos y minutos tras haber consumido la sustancia y persisten hasta 2 y 3 horas. Cuando el cannabis se administra por vía oral (aceites, pasteles, infusiones) la absorción es lenta y errática, la concentración máxima de THC en plasma aparece a las 2-4 horas y el inicio de los efectos se da entre media hora y 2 horas post administración, pudiendo durar los mismos unas 6 horas. La presencia de comida puede retrasar la absorción de THC

El THC es una molécula muy lipofílica por lo que atraviesa con facilidad la barrera hematoencefálica (BHE) y la placentaria. Por esta afinidad a los lípidos se une a la grasa corporal, lo que provoca una prolongación de sus efectos y de su acumulación en el organismo.El metabolismo inicial de los cannabinoides en el humo de la marihuana se produce en los pulmones, mientras que por vía oral son metabolizados en el tracto gastrointestinal y el hígado.

A causa de su alta solubilidad en lípidos, el THC se acumula en el tejido adiposo y persiste en el cuerpo durante un largo periodo de tiempo. Incluso después de una sola administración de THC, se encuentran niveles detectables en el cuerpo durante semanas o más (dependiendo de la cantidad administrada y la sensibilidad del método de evaluación).2

Sistema cannabinoide endógeno, constituido por unos ligando, los endocannabinoides: araquidonil etanolamina y araquidonilglicerol. Se han descrito dos tipos de receptores para cannabinoides: CB1 (cerebro) y CB2 (sistema inmune). La distribución cerebral de los endocannabinoides y de los receptores CB1 ha permitido conocer las funciones en las que está involucrado este sistema. Participa, a través de:

• Modular la actividad de los neurotransmisores
• Regulación del comportamiento motor
• Secreción de hormonas adenohipofisarias.3

Se han registrado pocos casos de muerte en humanos, sobrevenida por sobredosificación de marihuana. La dosis oral letal estimada para los humanos es unas 4.000 veces mayor que la conductualmente activa. La exposición crónica a los cannabinoides aumenta la toxicidad en los animales. No obstante, aun en estos casos, las dosis letales son todavía más de 1.000 veces mayor que las necesarias para provocar efectos conductuales en los humanos.

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