Determinacion Cualitativa-Cuantitativa De Carbohidratos

PRACTICA N º2 BIOQUÍMICA II

DETERMINACIÓN CUALITATIVA

DE CARBOHIDRATOS

I.- INTRODUCCION

Los carbohidratos desempeñan en los organismos vivos diversas funciones. Los animales los emplean de preferencia como combustible para producir energía, cuando los reciben en exceso los almacenan en forma de polisacáridos (glucógeno) o los convierten en grasa para ser utilizadas en el momento oportuno. Las plantas pueden sintetizar o almacenar grandes cantidades de carbohidratos, especialmente mientras ocurre la fotosíntesis, los que servirán como fuente energética para ellos mismos o para los animales.

Por otro lado, diversos glúcidos o derivados de ellos contribuyen a la formación a la formación de estructuras de sostén, pues son constituyentes de sustancias como la celulosa en los vegetales, los mucopolisacáridos en los animales y diversos glúcidos complejos en la pared bacteriana. Además, numerosas moléculas esenciales para cualquier célula, como los ácidos nucleicos y numerosas coenzimas poseen residuos hidrocarbonados.

Químicamente, los carbohidratos son derivados aldehídicos o cetónicos de alcoholes superiores polivalentes o compuestos que por hidrólisis dan estos derivados. Se clasifican en cuatro gran des grupos: Monosacáridos, disacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Tiene diferentes propiedades físicas y químicas, y en base a ellas existen métodos que nos permiten diferenciarlos, lo que constituye el objetivo de esta práctica.

II.- OBJETIVOS

2.1. Reconocer los diferentes tipos de carbohidratos

2.2. Identificar la presencia de azúcares reductores provenientes de la hidrólisis ácida de muestras de carbohidratos.

III. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS

3.1 EQUIPOS

3.1.1 Balanza

3.1.2 Baño maría

3.2 MATERIALES Y REACTIVO

PROPORCIONADO POR EL ALUMNO

3.2.1 Una papa

3.2.2 5 gr de almidón por grupo de trabajo

PROPORCIONADO POR EL LABORATORIO

3.2.3 Solución de glucosa 1 %

3.2.4 Solución de sacarosa 1 %

3.2.5 Solución de maltosa 1 %

3.2.6 Solución de almidón 1 %

3.2.7 Solución de fructosa 1%

3.2.8 Solución alcohólica de Alfa naftol 5 %

3.2.9 Acido sulfúrico Q.P.

3.2.10 Reactivo de Selivanoff

3.2.11 Reactivo de Bradford

3.2.12 Acido clorhídrico 1,5 %

3.2.13 Solución de Hidróxido de potasio 1 %

3.2.14 Solución de Fehling “A”

3.2.15 Solución de Fehling “B”

3.2.16 Tubos de ensayo

3.2.17 Pipetas de 1, 5 y 10 ml

IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

4.1 ACCION DE LOS ACIDOS OXIDANTES

4.1.1. REACCIÓN DE MOLISH.-

Es una reacción general de los carbohidratos que sirve para detectar su presencia en una sustancia problema. Una reacción negativa es una buena evidencia de la ausencia de azúcares, mientras que una prueba positiva es simplemente indicadora de la posibilidad de su existencia y requiere una mayor investigación.

TUBOS (ml) I II III IV

Sol. Glucosa 1% 2.0 ---- ---- ----

Sol. Sacarosa 1% ---- 2.0 ---- ----

Sol. Maltosa 1% ---- ---- 2.0 ----

Sol. Almidón 1% ---- ---- ---- 2.0

Sol. Alfa naftol 5% (gotas) 02 02 02 02

Mezclar bien agitando el tubo, agregar lentamente por las paredes

Acido sulfúrico 2.0 2.0 2.0 2.0

Observar en la interfase la aparición de un anillo rojo violeta oscuro, lo cual indica una reacción positiva. Esta reacción es debida a la condensación de los furfurales formados por la acción del ácido con el alfanaftol.

4.1.2. REACCION DE SELIVANOFF.-

Esta es una reacción específica para azúcares con grupo funcional cetónico.

TUBOS (ml) I II III

Sol. Fructosa 1% 1.0 ---- ----

Sol. Glucosa 1% ---- 1.0 ----

Sol. Sacarosa 1% ---- ---- 1.0

Rx. Selivanoff 5.0 5.0 5.0

Mezclar bien y someter a baño maría hirviente. Observar lo que sucede en los tubos, a intervalos de 3 minutos, durante 15 minutos.

La reacción es positiva cuando se observa una coloración rojo – cereza.

4.1.3. REACCION DE BARFOED.-

Esta prueba se utilizar para diferenciar monosacáridos de disacáridos

TUBOS (ml) I II III IV

Sol. Glucosa 1% 1.0 ---- ---- ----

Sol. Fructosa 1% ---- 1.0 ---- ----

Sol. Sacarosa 1% ---- ---- 1.0 ----

Sol. Maltosa 1% ---- ---- 1.0

Rx Barfoed 5.0 5.0 5.0 5.0

Mezclar bien y someter a baño maría hirviente por espacio de 5 minutos,

...