Determinación cuantitativa de Alcohol etílico por espectrofotometría al visible

PRÁCTICA No. 5 Determinación cuantitativa de Alcohol etílico por espectrofotometría al visible

en fluidos biológicos de Homo sapiens sapiens. Análisis cualitativo del consumo de alcohol.

5.1 Marco teórico

El abuso del alcohol constituye uno de los mayores problemas sanitar ios. El consumo de bebidas

alcohólicas forma par te de las costumbres sociales de nuestro medio, con la que cualquier per sona

está fami liar izada y, a diferencia de otras drogas de abuso se permite y promociona su consumo. El

consumo de bebidas alcohólicas, por si mismo, constituye un problema de salud, pero además se

convier te en un gran problema social por las impor tantes repercusiones que tiene en muchos

aspectos de la vida diar ia: en el ámbito laboral, familiar y social.

Desde el punto de vista médico legal se trata de un problema de gran frecuencia, ya que el alcohol

suele estar involucrado en multitud de cuestiones relacionadas con el ámbito judicial: accidentes de

tránsito, accidentes laborales, r iñas, peleas, homicidios y suicidios. Por tanto, probablemente, se

trata de una de las pruebas analíticas más solicitadas en el ámbito médico legal.

La alcoholemia es una función de la cantidad de alcohol etílico absorbido por unidad de tiempo y su

eliminación, y en ella influyen factores como el contenido estomacal previo o el tipo de bebida

inger ida. Si el estómago está vacío, puede producir se un rápido paso al duodeno y la sangre, o si la

ingestión es simultánea con alimentos sólidos se retrasa el vaciamiento gástr ico, y se hace más lenta

la absorción. Respecto a la graduación alcohólica de las bebidas, está demostrado que el paso de

etanol a la sangre es más rápido cuando la bebida tiene una graduación del 20 al 30% de etanol.

La mayor par te del alcohol inger ido sufre el proceso de biotransformación hepática, secuenciándose

en tres fases. El alcohol es oxidado a nivel hepático dando lugar a acetaldehído, después a ion

acetato con formación de aceti lcoenzima A que se incorpora al ciclo de ácidos carboxílicos para,

finalmente, producir dióxido de carbono. Las concentraciones sér icas de etanol disminuyen por

metabolización, según una cinética de orden cero, a un r itmo de 0,15-0,30 g/L/h, en bebedores

habituales elmetabolismo está aumentado por inducción enzimática. Se considera que, al menos 5%

del etanol inger ido se elimina sin metabolizar por or ina, sudor o intercambios respirator ios.

El efecto tóxico del etanol radica en la depresión de las funciones del sistema nervioso central, y

existe una cor relación proporcional entre los efectos depresores y la concentración de alcohol en la

sangre.

5.2 Competencias

- Conoce y diferencia conceptual y exper imentalmente los signos caracter ísticos de

intoxicación aguda por bebidas alcohólicas, según el grado de alcoholemia.

- Determina la concentración de alcohol etí lico en sangre de per sonas, por

espectrofotometr ía al visible.

- Realiza el dosaje etílico cualitativo en presuntos consumidores de bebidas alcohólicas.

- Domina las técnicas cualitativas y cuantitativas más utilizadas en la evaluación de la

alcoholemia.

- Trabaja en equipo, con orden, puntualidad y limpieza en el laborator io y en el repor te de

sus observaciones y resultados.

5.3 Materiales y equipos:

- Biológico: sangre anticoagulada de Homo sapiens sapiens en recipiente con cier re

hermético.

- Espectrofotómetro ultravioleta-visible

- Estufa

- 1 Campana extractora de gases

- 4 Cámaras de Conway

- 4 Fiolas de 10 mL

- 04 Frascos de vidrio tipo vial con anticoagulante

02 pares de guantes descar tables

- 4 jer ingas de 5 mL.

- 4 ligaduras

- 4 Probetas de 10 mL

- 4 Pipetas graduadas de 1 mL

- 4 Pipetas graduadas de 2 mL

- 02 Pizetas

- Sorbetes

- Torundas de algodón.

- Tubos de ensayo

Reactivos:

- Ácido sulfúr ico 50%

- Agua oxigenada

- Agua destilada

- Carbonato de potasio 10%

- Permanganato de potasio

- Solución de dicromato de potasio 0,106 N en ácido sulfúr ico 22,08 N (Pesar 5,2 g de

K2Cr207 en 400 mL de H20 (d) y llevar a 1 L en H2SO4 (c) ).

5.4 Procedimientos:

a) Toma de muestras biológicas para la determinación de la alcoholemia

1. Se extraerá sangre venosa (5mL) con jeringa de un solo uso, sin desinfectar la piel con

alcohol ni tintura de yodo, sino con jabón quirúrgico, aunque después se realice una

apropiada desinfección. Se deberá añadir a la sangre 50mg de oxalato de sódico como

anticoagulante y 50 mg de fluoruro sódico como conservador, ambos en forma sólida, y

se preservará la muestra del calor ; el tubo debe quedar totalmente lleno,

herméticamente tapado y convenientemente identificado.

2. El rótulo deberá consignar : Apellidos y Nombres. Día, mes, año, hora del hecho. Día,

mes, año, hora de extracción.

3. Se deberá mantener refr igerada la muestra hasta su procesamiento.

b) Cuantificación del etanol en sangre

Se uti lizará elmétodo de Microdifusión con cámaras de Conway.

Las enzimas de la sangre, reaccionan con el carbonato de sodio permitiendo la salida del

dióxido de carbono y alcohol. El alcohol se difunde y reacciona con la mezcla oxidante

(sulfocrómica), luego se cuantifica espectrofotométr icamente a 450 nm.

c) Procedimiento para Cuantificación de alcohol etílico en sangre

1. Se colocan en el compar timento interno de la cámara de Conway (tamaño pequeño), 0,5

mL de la solución ácida de K2Cr207. En un extremo del compar timento externo, se

agregan 0,2 mL de sangre y en el otro extremo del mismo 0,2 mL de la solución saturada

de K2C03, Tapar la cámara y hacer la girar cuidadosamente (en forma hor izontal) sobre la

mesa de trabajo, para poner en contacto los reactivos colocados en el compar timento

externo. Efectuar paralelamente un b lanco con agua desti lada.

2. En el caso de uti lizar cámaras de Conway (tamaño grande) los volúmenes de los reactivos

a utilizar ser ían los siguientes: 2 mL de la solución ácida de K2Cr 207, 1 mL de sangre y 1

mL de la solución saturada de K2C03.

3. Dejar difundir 1 hora a temperatura ambiente o

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