EXTRACCIÓN DE ADN PLASMÍDICO POR TÉCNICA DE MANIATIS Y LÍSIS ALCALINA

EXTRACCIÓN DE ADN PLASMÍDICO POR TÉCNICA DE MANIATIS Y LÍSIS ALCALINA

1Universidad Tecnológica de Tecámac,

RESUMEN

Se realizó la extracción de DNA plasmidico de una cepa de E.coli por medio de dos técnicas diferentes las cuales fueron la Técnica de Maniatis y Lisis Alcalina, de las cuales al momento de realizar la debida electroforesis se determinó que no hubo diferenciación alguna entre la cantidad de DNA plasmidico obtenido.

ABSTRACT

Extracting plasmid DNA from an E. coli strain was performed by two different techniques, which were the technique of Maniatis, and alkaline lysis, which at the moment of electrophoresis due determined that no differentiation between the amount of plasmid DNA obtained it.

INTRODUCCIÓN

Los plásmidos son moléculas de DNA extracromosomal los cuales están presentes en algunas células bacterianas, levaduras y hongos. Los mismos poseen DNA de doble hebra, mayormente son circulares pero también se han encontrado plásmidos lineales.

Los plásmidos no son esenciales para el desarrollo o supervivencia de la célula pero le proveen una ventaja competitiva a las células que los poseen, dado a que los plásmidos poseen genes que le confieren características selectivas a su huésped tales como resistencia a antibióticos, nuevas habilidades metabólicas como degradación de carbohidratos, factores de virulencia y producción de toxinas entre otros.

Los plásmidos poseen un interés singular en Ingeniería Genética por ser uno de los sistemas vectores más sencillos de usar. Un vector de clonación es un sistema que permite introducir en una célula hospedadora un fragmento de DNA que se pretende clonar; en esta célula hospedadora el vector se replica y expresa, en su caso. La molécula que resulta de la unión de un DNA vector con el DNA de interés (denominado entonces "inserto") se denomina molécula de vector recombinante.

HIPÓTESIS

Al realizar la electroforesis se observará mayor cantidad de DNA plasmidico sobre el carril en donde se encuentra la muestra en la que se aplicó la técnica de lisis alcalina.

OBJETIVOS

 Extraer DNA plasmidico de E. coli utilizando el método de Maniatis

 Extraer DNA plasmidico de E.coli utilizando el método de lisis alcalina

 Realizar electroforesis para comparar resultados

MARCO TEÓRICO

Existen diversos métodos para el aislamiento de plásmidos. Las técnicas de Minipreps o mini preparaciones de plásmidos, permiten la recuperación de plásmidos de DNA circular sobre el DNA cromosomal. El tratamiento de las células con una base de pH alto o un detergente interrumpe el apareamiento de las bases nitrogenadas, ocasionando que el DNA cromosomal se desnaturalice y se separe. Por el contrario la configuración superenrrollada del plásmido se mantiene estable.

La mayoría de las técnicas reportadas para efectuar la extracción de DNA plasmidico, aconsejan un crecimiento bacteriano en fase estacionaria temprana, con una valor de densidad óptica de 5540 nm de aproximadamente 0.6 a 0.8 en esta fase los cultivos se observan densos.

Un método de aislamiento de DNA plasmidico rápido y que permite visualizar

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