Electroforesis

Fundamento.

Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo eléctrico, estas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el ánodo (el polo positivo).

La separación electroforética es una de las técnicas más empleadas en Bioquímica y consiste en

la separación de moléculas cargadas (en este caso, aminoácidos) en presencia de un campo

eléctrico. Al existir una diferencia de potencial que genera un campo eléctrico, las moléculas se

desplazarán hacia el polo positivo (ánodo) o hacia el polo negativo (cátodo), en función de su

carga eléctrica. La velocidad de migración electroforética de una molécula dada depende la

carga eléctrica, de las dimensiones moleculares y del soporte empleado. Para realizar una

electroforesis se necesita una fuente de alimentación (que genera la diferencia de potencial), una

cubeta y un soporte (papel o diferentes geles de acetato de celulosa, agarosa o poliacrilamida).

En el caso de moléculas pequeñas como los aminoácidos, se utiliza el papel como soporte. Así,

se deposita una muestra de la solución problema (por ejemplo una mezcla de aminoácidos) Veronica Gonzalez Núñez -12-

sobre la tira de papel, que hace de puente entre los dos polos (que se encuentran en dos

cubetas con tampón a un pH determinado). La fuente de alimentación se enciende, generando

un campo eléctrico y transcurrido un cierto tiempo, se apaga, se retira el papel, se revela con un

reactivo apropiado y se identifican los componentes de la mezcla. La carga neta de cada

aminoácido al pH en el que tiene lugar la electroforesis determinará la dirección y la velocidad de

la migración electroforética. De esta forma, se pueden separar los aminoácidos presentes en una

mezcla en disolución.

- Aquellos aminoácidos cuyo pI = pH del tampón de electroforesis no presentarán carga neta, ya

que la forma predominante es el Zwitterion o ion dipolar; dichos aminoácidos no presentarán

movilidad electroforética.

- Aquellos aminoácidos cuyo pI > pH estarán cargados positivamente y, por lo tanto se

comportarán como cationes – se desplazarán hacia el polo negativo o cátodo.

- Aquellos aminoácidos cuyo pI < pH estarán cargados negativamente y, por lo tanto se

comportarán como aniones – se desplazarán hacia el polo positivo o ánodo.

Los aminoácidos pueden cuantificarse mediante la reacción del grupo α-amino con ninhidrina. Este compuesto reacciona rápidamente con el grupo amino, lo oxida

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