Experimento 3. PROTEINAS Obtención De Emulsina

CUESTIONARIO

1. ¿Con qué otros nombres se conoce a la emulsina?

β - Glucosidasa, Glusidasa o Carbohidrasa

2. ¿Por su modo de acción, ¿cómo se clasifica esta enzima?

En 1837 Liebig extrajo de las almendras un fermento soluble que catalizaba la descomposición de la amigdalina en glucosa y ácido hidrociánico y lo llamó “emulsina ”. La cual ese clasifica dentro de las hidrolasas porque rompe enlaces β.

3. Escriba la reacción que se produce entre la enzima y el glucósido.

4. ¿Qué otro glucósido natural podría emplear para comprobar la actividad de la enzima?

La (+)-celobiosa, y metil-α -D-glucósido

5. ¿Qué usos podría darle al residuo de las almendras?

Se podrían lavar y usarlas de abono para las plantas o para hacer compostas.

6.- Proponga un método para hacer la determinación cuantitativa del p-nitro fenol formado durante la reacción con emulsina:

El P-nitro fenol es un compuesto amarillo-coloreado brillante que tiene absorbencia máxima en 405 NM. El incremento en absorbancia a 405 nm es proporcional a la cantidad de emulsina en la muestra.

7.- El método de extracción que se empleó para la obtención de aceite de almendras, ¿influye en la actividad de la emulsina? Explique de acuerdo con los resultados obtenidos.

Sí influye. Los métodos que se utilizaron para obtener aceite de almendras fueron a reflujo y a temperatura ambiente. Teóricamente el método de reflujo tiene mayor rendimiento, sin embargo, como la emulsina es una enzima el estar sometida a altas temperaturas la pudo haber desnaturalizado y quitándole las propiedades enzimáticas.

ANALISIS DE RESULTADOS

Como se muestra en la tabla No. 1 se comprobó la actividad enzimática de la emulsina después de hacer pruebas en 3 viales, uno con glucósido α, otro con glucósido β y el último solamente con emulsina. Se observó que las pruebas dan positivo sobre p-nitrofenil-β-D-glucósido ya que se libera p-nitrofenol, que es un compuesto de color amarillo por lo que se puede observar claramente que la emulsina actúa hidrolizando solo a los enlaces β resultando solo positivo en el glucósido βD y negativo en el glucósido αD, el cambio de coloración se observa a los 20 segundos de adicionar el glucósido β, la solución se torno ligeramente verde amarillento y al agregar una gota de NaOH el color se volvió más intenso.

CONCLUSIONES

Se extrajo emulsina a partir de almendras desengrasadas, se comprobó la actividad enzimática de la emulsina la cual hidroliza los enlaces β. Las enzimas, son proteínas, que se encargan de catalizar reacciones químicas, para poder funcionar, deben tener sus estructuras intactas, cuando por medio de ciertas reacciones, o por medio del calor, se inactivan a las enzimas, es decir se desnaturalizan, y al hacerlo, se impide la función enzimática.

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