Extracción De DNA

a) Comenta acerca del método Chelex de extracción de DNA de sangre. Indique las diferencias con el método utilizado.

Es un método bastante rápido, de una sola reacción y bastante efectivo, pero a diferencia de los otros métodos no requieren compuestos tóxicos.

b) Indique la diferencia de acción de los buffer LE y buffer LL

• El Buffer LE es una buffer de lisis para eritrocitos, esto quiere decir que este buffer se encarga de destruir a todos los eritrocitos dejando así solo los leucocitos.

• El Buffer LL es un buffer para la lisis de leucocitos este tiene compuestos que se encargan de destruir la pared celular y membrana nuclear para así liberar el ADN.

c) Mencione las diferencias entre detergente iónicos y no iónicos. Cite 3 ejemplos.

• Los detergentes iónicos rompen la membrana nuclear Ej. SDS, ácido esteárico, Cetoestearil sulfato de sodio.

• Los detergentes no iónicos rompen la membrana celular Ej. Tween 20, Laurato de sorbitán, Span 20.

d) ¿Por qué es importante agregar el EDTA al buffer de lisis de leucocitos?

Porque inhibe las DNasas y así no se perdería el DNA que se quiere aislar.

e) Describa el procedimiento de cuantificación del DNA utilizando marcadores de Peso molecular.

Se prepara el gel de agarosa a la concentración deseada luego se lo coloca en la cámara electroforética y se le pone el buffer de carga; aparte las muestras se mezclan con el buffer de carga y un tracking dye para observar la corrida de la muestra, luego son colocados en los pocillos correspondientes y también se coloca un marcador de peso molecular, una vez terminada la corrida el marcador con pesos ya conocidos nos ayudara a saber cuántas pares de base tiene nuestra muestra.

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