Extracción DNA

Cuestionario:

1. ¿Con qué finalidad se procesa el material biológico (kiwi, plátano, chícharo) en un mortero?

Para romper el tejido y suspender los núcleos en la solución se utilizan métodos mecánicos. Generalmente se efectúa una homogenización (con mortero, taladro, torno, o vórtex) que tiene por objeto romper el tejido y molerlo a un grado muy fino.

2. ¿Para qué se utiliza el detergente? ¿Para qué se utiliza el etanol?

El detergente disuelve los lípidos (moléculas grasas) y las proteínas de la membrana celular, rompiendo las uniones que mantienen la integridad de la misma. De esta forma se libera el contenido celular. Luego, el detergente forma complejos con los lípidos y las proteínas, permitiendo que los mismos sean separados del DNA por filtración. Así se libera el DNA. El etanol cuando se agrega a la mezcla, permite que los componentes, excepto el ADN, permanezcan en la solución mientras el ADN precipita en la capa de etanol.

3. ¿Cuál es la importancia biológica del DNA? ¿A partir de qué otros tejidos podrías extraer DNA?

Las funciones biológicas del ADN incluyen el almacenamiento de información (genes y genoma), la codificación de proteínas (transcripción y traducción) y su autoduplicación (replicación del ADN) para asegurar la transmisión de la información a las células hijas durante la división celular.

Se puede extraer DNA de casi cualquier tejido humano y vegetal, células, partículas de virus. Las fuentes de DNA más comunes son: sangre, semen, tejido de epitelial, células del folículo capilar y saliva.

4. Si quisieran utilizar este DNA para conocer su secuencia, ¿Qué tratamiento añadirías? ¿Se trata de DNA puro?

El ADN molde o segmento de ADN que se desea secuenciar. Para poder secuenciar un segmento de ADN, previamente se necesita tener gran cantidad de ese fragmento, y por tanto, hay que clonarlo en un vector apropiado. Además, debe estar en estado de hélice sencilla.

Un enzima que replique el ADN, normalmente la ADN Polimerasa I del bacteriofago T4. La ADN Polimersa I del fago T4 emplea como molde ADN de hélice sencilla y siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas va añadiendo nucleótidos a partir de un cebador o "primer".

Un cebador o "primer" que suele ser un oligonucleótido corto de alrededor de 20 bases de longitud necesario para que la ADN polimerasa I comience a añadir nucleótidos por el extremo 3' OH. Este cebador debe poseer una secuencia de bases complementaria a la del fragmento de ADN que se desea secuenciar. Debido a que la secuencia de nucleótidos del segmento que se quiere secuenciar es desconocida, se emplea un "primer" con secuencia complementaria al vector empleado para clonar el fragmento de ADN, además, este cebador procede de una región del vector muy cercana

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