Extracción y determinación de la capacidad antioxidante en muestras de alimentos
Enviado por Ximeee1234 • 7 de Marzo de 2023 • Informe • 946 Palabras (4 Páginas) • 36 Visitas
[pic 1] Universidad de Sonora 13/01/2022
Práctica X. Extracción y determinación de la capacidad antioxidante en muestras de alimentos.
Nombre de los integrantes del equipo
Universidad de Sonora. Carrera a la que pertenecen. Asignatura: Laboratorio de Química. Catedrático Dra. Maribel Ovando Martínez. Semestre 5. Blvd. Luis Donaldo Colosio s/n, Edificio 7G, Hermosillo, Sonora. Correo electrónico del integrante encargado de enviar el reporte.
Introducción
Los antioxidantes son sustancias naturales o fabricadas por el hombre que pueden prevenir o retrasar algunos tipos de daños a las células. Los antioxidantes se encuentran en muchos alimentos, incluyendo frutas y verduras. Los productos naturales de las plantas han tenido una considerable atención debido a las evidencias recientes que sugieren su capacidad para aliviar el estrés oxidativo y otras enfermedades relacionadas. Los metabolitos secundarios de las plantas, tales como compuestos fenólicos, flavonoides y terpenoides juegan un papel importante como antioxidantes naturales e inmunomoduladores (1).
Debido a lo anterior, el objetivo de la práctica fue evaluar la propiedad antioxidante en té verde, mediante el análisis de compuestos fenólicos totales y capacidad antioxidante para inhibir el radical DPPH.
Metodología
Materiales
Se utilizó como materia prima, té verde, obtenido del supermercado local, Hermosillo, Sonora. Entre los reactivos utilizados se usó ácido gálico, Trolox, regulador de acetato de sodio 0.1 M, HCl 0.25N, NaOH 1M, Na2CO3 7.5% y agua destilada. Los equipos y material de vidrio utilizados fueron centrífuga, tubos de ensaye, microplacas de 96 pozos, micropipetas, sonicador, lector de microplacas y baño de agua.
Métodos
Extracción de fenoles de té verde
Se pesaron 10g de té verde, a los cuales se le adicionaron 20 mL de metanol al 70% y se mezclaron con un vortex durante 30 s. Posteriormente, la muestra se sónico durante 30 min a 4 ºC y se centrifugó (15000 rpm, 15 min, 4 ºC). Los sobrenadantes se filtraron con un papel filtro #4 y se guardaron a -18 ºC para posterior determinación de fenoles totales y capacidad antioxidante. Nota: la extracción de los compuestos fenólicos de té verde se realizó bajo condiciones de oscuridad.
Determinación de fenoles totales
En una microplaca de 90 pozos se adicionaron 30 μL del antioxidante problema por pocillo, excepto al pocillo blanco, al cual se le agregó metanol al 80% en lugar del extracto. Posteriormente se agregaron 150 μL del reactivo de folin-ciocalteu 1N y 120 μL de Na2CO3 al 7.5%, se dejaron reposar por 30 min en la obscuridad y finalmente se realizaron las lecturas a 750 nm en el lector de microplacas. Cada muestra se analizó por sixplicado.
Capacidad antioxidante por DPPH
En una microplaca de 96 pozos se adicionaron 20 μL de muestra, excepto al pocillo con el blanco, al cual se le agregaron 20 μL de metanol al 80%. Posteriormente se agregaron 280 μL del radical DPPH ya preparado y ajustando a la absorbancia de 0.7 ± 0.2 a 515 nm en el lector de microplaca.
Resultados y Discusión
Los compuestos fenólicos son muy importantes como constituyentes de las plantas debido a su habilidad para secuestrar radicales libres, que está relacionada con la presencia del grupo hidroxilo (2). Las hojas de té verde pueden contener 35% de su peso en seco en polifenoles que son principalmente flavonoles como la catequina, epicatequina (1). Estos compuestos han mostrado actividad antioxidante a través de su capacidad para reaccionar con las especies reactivas de oxígeno y quelar iones metálicos (3). En la Figura 1 se muestra la curva de calibración de ácido gálico obtenida, en donde la concentración promedio encontrada de fenoles totales en el extracto de té verde resultó de 2.56 mg EAG/g (Tabla 1). Esto indica que los contenidos fenólicos de té verde contribuyen a la actividad antioxidante de manera determinante.
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