Fisiologìa Microbiana

Las bacterias pueden utilizar nitratos en varios procesos, entre ellos asimilación, desasimilación y desnitrificación.

1. Asimilación: implica la reducción de nitrato a amoniaco, el cual puede ser utilizado por las células para la síntesis de aminoácidos y otros compuestos nitrogenados (es decir lo asimila como fuente de nitrógeno).

2. Desasimilación: es la utilización del nitrato como aceptor final de electrones en ausencia de oxígeno libre, reduciéndose a nitritos, que aparecen en el medio.

3. Desnitrificación: es la reducción del nitrato hasta productos finales gaseosos como nitrógeno, óxido nitroso, o el óxido de nitrógeno.

Para determinar la capacidad de los microorganismos de reducir el nitrato, se inocula el microorganismo en un caldo nitratos o en algún otro medio que proporcione nitratos, y luego de incubar, se determina si hay nitrito al añadir ácido sulfanílico y α-naftilamina. El primero reacciona con el nitrito y forma una sal de diazonio, que a su vez se acopla con el reactivo α-naftilamina y produce p-sulfobenceno-azo- α-naftilamina, un complejo azo de color rojo, soluble en agua; según la siguiente reacción.

NO3NO2 + ac. Sulfanílico  sal de diazonio

Sal de diazonio + α-naftilamina  p-sulfobenceno-azo-α-naftilamina (complejo rojo)

Por lo tanto la formación de un color rojo después de añadir los dos reactivos indica la presencia de nitritos en el medio y se considera una prueba de reducción de nitratos positiva (desasimilación).

Si no se detecta color rojo después de añadir los reactivos, puede haber ocurrido que todo el nitrato haya sido reducido a amoniaco (asimilación) o gas (desnitrificación), o bien que no hubo reacción de nitratos. Entonces se debe añadir una pizca de zinc en polvo que reducirá el nitrato a nitrito, si es que estuviese presente. De este modo, la formación de un color rojo luego de adicionar el zinc, indica que había nitratos en el medio de cultivo, o sea que no había sido reducido por el microorganismo y por lo tanto, la prueba se interpreta como negativa. Si no se desarrolla el color rojo luego de adicionar el zinc, indica que no había nitratos, o sea que fueron reducidos totalmente a amoniaco, nitrógeno u otro producto y la prueba se interpreta como positiva (asimilación o desnitrificación).1

En condiciones aerobias las bacterias pueden oxidar la glucosa hasta CO2 gas. El oxígeno es el aceptor final de electrones en el mecanismo respiratorio. En condiciones anaeróbicas en ausencia de un aceptor de electrones como el nitrato, las bacterias solo pueden utilizar la glucosa por vía fermentativa. En el test de O.F se evalúa la capacidad de las bacterias para oxida y/o fermentar produciendo ácido que se detecta gracias al azul de bromotimol (indicador de pH) es útil en la detección de pseudomonas y enterobacterias.

Se inoculan tubos de medio de cultivo con asas de punta recta. Uno de los tubos se recubre con aceite o parafina para aislarlo del oxígeno (tubo de fermentación) y el otro no

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